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《生物合成咖啡酸苯乙酯體系的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜快速分析.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、第38卷分析化學(xué)(FENXIHUAXUE)研究簡(jiǎn)報(bào)第11期2010年11月ChineseJournalofAnalyticalChemistryDOI：10．3724／SP．J．1096．2010．01657生物合成咖啡酸苯乙酯體系的液相色譜．串聯(lián)質(zhì)譜快速分析盧定強(qiáng)“’蔣奔王俊趙輝凌岫泉柴宏夏亭(南京工業(yè)大學(xué)藥學(xué)院，南京210009)(江蘇省藥物研究所，南京210009)(江蘇科技大學(xué)生物與環(huán)境工程學(xué)院，鎮(zhèn)江212018)摘要建立液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜(LC—MS／MS)檢測(cè)生物合成咖啡酸苯乙酯體系中咖啡酸(Caffeicacid，
2、CA)和咖啡酸苯乙酯(Caffeicacidphenethylester，CAPE)的方法。采用LC．MS／MS電噴霧電離(ESI)，負(fù)離子選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)(SRM)模式檢測(cè)。以(乙腈)：(水)：(冰醋酸)=55：45：0．5為流動(dòng)相，流速1．0mIMmin，HypemilC色譜柱分離并檢測(cè)生物合成咖啡酸苯乙酯體系中的咖啡酸以及咖啡酸苯乙酯的含量，并對(duì)生物合成咖啡酸苯乙酯的收率進(jìn)行了動(dòng)力學(xué)分析。本方法在進(jìn)樣量為0．2～20g時(shí)具有良好的線性關(guān)系，咖啡酸和咖啡酸苯乙酯樣品的加標(biāo)回收率分別為93．4％～98．2％和90．3％～97．8％
3、，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1．79％～2．56％和1．82％～3．67％，咖啡酸苯乙酯收率在3d內(nèi)可以達(dá)到15．54％，表明本方法簡(jiǎn)便、快速、可靠。關(guān)鍵詞液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法；咖啡酸苯乙酯；咖啡酸；生物(酶)合成體系1引言咖啡酸苯乙酯(Cafeicacidphenethylester，CAPE)，化學(xué)名為3一(3，4一二羥基苯基)．2-丙烯酸苯乙醇酯，是蜂膠中的主要有效成分，具有抗氧化?、抑制DNAJ、抗病毒、抗菌、消炎、抗動(dòng)脈硬化及提高免疫力等多種藥理活性，其中抗腫瘤活性最為顯著，是當(dāng)前新藥研發(fā)的熱點(diǎn)化合物?？Х人岜揭阴サ闹苽浞椒ù?/p>
4、致包括：植物提取法、化學(xué)合成法和生物合成法J。生物合成法耗時(shí)，但具有合成條件溫和、操作簡(jiǎn)單、成本低等優(yōu)點(diǎn)，72h內(nèi)咖啡酸苯乙酯轉(zhuǎn)化率可以達(dá)到15．54％，是廣泛采用的制備方法。有關(guān)咖啡酸(Caffeicacid，CA)和咖啡酸苯乙酯測(cè)定已多有報(bào)道，包括不同樣品來(lái)源，如蜂膠j、紅景天(Rhodiolasacra)、蘋(píng)果汁等，采用的測(cè)定方法主要有薄層色譜法、毛細(xì)管電泳法]、氣相色譜法及高效液相色譜法等。但是，已報(bào)道的檢測(cè)方法多適用于包含咖啡酸及其衍生物等多組分的天然產(chǎn)物的分離檢測(cè)，操作繁雜，不適于咖啡酸苯乙酯生物轉(zhuǎn)化體系中咖啡酸和咖
5、啡酸苯乙酯的分析。本研究對(duì)咖啡酸的生物轉(zhuǎn)化進(jìn)行了研究，建立了簡(jiǎn)單快速的測(cè)定生物合成咖啡酸苯乙酯體系中咖啡酸和咖啡酸苯乙酯的液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜方法。通過(guò)對(duì)咖啡酸苯乙酯生物合成體系中咖啡酸苯乙酯含量及其酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的測(cè)定和研究，以便于在化工設(shè)計(jì)和反應(yīng)分離耦合的方向來(lái)提高生物法的工業(yè)化效率。2實(shí)驗(yàn)部分2．1儀器與試劑Waters2695型高效液相色譜儀、WatersMicromassQuattroMicroAPI型三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀，ESI源。MassLynx數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)(美國(guó)Waters公司)；DHZ—CA恒溫氣浴搖床(太倉(cāng)實(shí)驗(yàn)儀器
6、設(shè)備廠)；FA1104N電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；MilliQ超純水器(美國(guó)Millipore公司)?？Х人?南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司)；咖啡酸、咖啡酸苯乙酯標(biāo)準(zhǔn)品、諾維信脂肪酶435(Sigma公司)；乙腈、甲醇、丙酮、冰醋酸(色譜純，Sigma公司)；實(shí)驗(yàn)用水為經(jīng)Milli．Q凈化系統(tǒng)(0．22Ixm過(guò)濾膜)過(guò)濾的去離子水；氮?dú)狻鍤?>99．999％)；其它試劑均為分析純。2．2色譜-質(zhì)譜條件(1)液相色譜條件HypersilC8分析柱(250mm×4．6mnli．d．，5m，大連依利特公司)；流動(dòng)2010-0
7、1-09收稿；2010~4—11接受本文系國(guó)家自然科學(xué)基金(No．20876076)，國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(No．2009CB724700)，江蘇省自然科學(xué)基金(No．BK2009213)資助項(xiàng)目E—mail：ludingqiang@njut．edu．cn1658第38卷相：(乙腈)：(水)：V(冰醋酸)=55：45：0．5；流速：1．0mL／rain；進(jìn)樣量：20L；紫外檢測(cè)器；檢測(cè)波長(zhǎng)：325nm；柱溫：30℃。(2)質(zhì)譜條件電噴霧離子源(ESI)，負(fù)離子模式，選擇反應(yīng)檢測(cè)(SRM)，噴霧電壓：2800V，離子傳輸毛細(xì)管
8、溫度：350℃，源內(nèi)碰撞誘導(dǎo)解離電壓：20V，錐孑L氣流速：1．2l_／min，干燥氣(N)流速：10L／rain，碰撞氣體為氬氣。2．3對(duì)照品溶液的配制準(zhǔn)確稱取咖啡酸苯乙酯和咖啡酸對(duì)照品各10mg于10mL容量瓶，用流動(dòng)相溶液超聲溶解并定容，作為母液。再將該母
