水稻類病變突變體spl5基因的圖位克隆.pdf

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1、MAP—BASEDCLONINGOFTHELESIONMIMICMUTANTspl5INRICEByHaoLiangADissertationSubmittedtoZhejiangNormalUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofScienceSupervisedbyProfessor:MaBojunCollegeofChemistry&LifeScience,ZhejiangNormalUniversity,Jinhua,321004,ChinaMay,2012————————————

2、—————————旦莖二—————————一l帆帥燦哪吣㈣帥眥帆目錄Y21—9—3712摘要???????????????????????????????一ⅣABSTRACT??????????????????????????????????????V第一章文獻綜述??????????????????????????..11植物類病變突變體概述?????????????????????.11.1影響植物類病變的環(huán)境因子?????????????????11.2植物類病變基因的克隆???????????????????11.3植物類病變的分子機制與信號轉導途徑????????????3

3、1.3.1ROS的調(diào)節(jié)機制???????????????????.31.3.2SA介導的抗病信號途徑????????????????31.3.3JA和ET介導的抗病信號途徑?????????????.42水稻類病變壞死突變體及基因的研究進展?????????????.42.1水稻類病變壞死突變體的研究進展??????????????42.2水稻類病變基因的克隆???????????????????62.2.1spl7、splll、sl、Spl28和OsRLINl基因?????????.62.2.2spn8和attml基因??????????????????72.2.3oslsdl、O

4、sNPRl和OsACDRl基因???????????.83水稻類病變突變體研究意義及展望????????????????.8第二章水稻類病變突變體spl5的抗病分析???????????????101材料與方法??????????????????????????101.1水稻材料及培養(yǎng)?????????????????????..101.2白葉枯病菌及接種????????????????????一1l1.3RNA提取?????????????????????????????.111.4eDNA第一條鏈的合成??????????????????一111.5RT-PCR表達分析?????

5、???????????????..122結果分析???????????????????????????122.1突變體sp/5的抗病分析??????????????????.122.2抗病相關基因表達分析??????????????????.143討論??????????????????????????????????????..15目錄第三章水稻類病變SPL5基因的圖位克隆及表達分析??????????.171材料與方法??????????????????????????171.1實驗材料????????????????????????.171.2水稻基因組DNA的提取??????

6、???????????..171.3PCR擴增????????????????????????????????.181.4候選基因eDNA全長的克隆????????????????181.5pC御臨M1300S.2x35S::SPL5過表達載體的構建???????.181.5。1SPL5eDNA的制備???????????????????????.181.5.2pCAMBIAl300S載體質粒的制備???????????..191.5.3連接、轉化和克隆的鑒定???????????????191.6根癌農(nóng)桿菌介導的水稻遺傳轉化??????????????.201.6.1質粒轉化農(nóng)桿菌

7、感EHAl05??????????????201.6.2愈傷誘導??????????????????????201.6.3遺傳轉化??????????????????????201.6.4抗性植株的再生???????????????????20l。7轉基因水稻的驗證????????????????????.211.7.1轉基因水稻的PCR驗證???????????????..211.7.2轉基因水稻的表達分析????????????????211.7.3轉

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