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1、江西化工2014年第1期優(yōu)良醋酸茵的分離鑒定徐佳劉明珠(南昌理工學院，江西南昌330045)摘要：采用稀釋平板分離法和劃線分離法，從自然發(fā)酵蘋果醋醪液中分離選出優(yōu)良菌株P一7，并對該菌株的形態(tài)學及其生理生化學特征進行研究，該菌株在平板上菌體生長旺盛，菌落呈油脂狀，米白色，表面平滑，邊緣整齊，培養(yǎng)基內不產(chǎn)生色素，菌落周圍產(chǎn)生透明圈，通過革蘭氏染色試驗和氧化發(fā)酵試驗，確定該菌種為氧化性的革蘭氏陰性桿菌，無鞭毛運動，具有氧化乙醇和乙酸等生化特征，通過《伯杰細菌鑒定手冊》，菌株P一7初步鑒定為醋酸醋酸細菌醋酸亞種。關鍵詞：醋酸
2、菌分離鑒定果醋是以水果或果品加工的下腳料為主要原料，和利夫森二氏培養(yǎng)基]、乙醇氧化培養(yǎng)基C4J、牛肉膏蛋經(jīng)酒精發(fā)酵、醋酸發(fā)酵釀造而成的一種酸性調味品或白胨培養(yǎng)基J、Hoyer—Frateur培養(yǎng)基J、午肉膏蛋白飲料?。隨著人們生活水平的不斷提高，果醋的保健胨培養(yǎng)基、產(chǎn)硫化氫培養(yǎng)基、生酮實驗培養(yǎng)基、功能也越來越受到人們的重視，正掀起喝果醋的熱潮。葡萄糖培養(yǎng)基、產(chǎn)葡萄糖酸實驗培養(yǎng)基【4]、明膠液化在我國民間，食醋生產(chǎn)通常采用存在于自然界中培養(yǎng)基】、葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基¨J。的醋酸菌進行自然發(fā)酵。在工廠為了提高產(chǎn)量和質1．1
3、．4試劑量，避免雜菌污染，采用人工接種的方式進行發(fā)酵。果溴百里酚藍1％(v)水溶液J、溴酚藍0．04％醋品種是影響果醋品質的關鍵因素之一，用于食醋生(g／v)水溶液、pH7．21／15M磷酸緩沖溶液、菲林產(chǎn)的細菌有紋膜醋酸菌(A．a(chǎn)ceti)、許氏醋桿菌(A．試劑J、甲基紅(Methylred)指示液-4J、一萘酚溶schutzenbachii)、奧爾蘭醋酸酐菌(A．1"ancens)、巴氏醋液引。酸菌(A．pasteurianus)、巴氏亞種(滬釀1．O1)等j，但1．2試驗方法目前使用得最多的是：惡臭醋桿菌、渾濁變
4、種、巴氏醋1．2．1菌種的分離?酸菌、巴氏亞種4種醋酸菌J。目前國內外對醋酸菌水果一清洗+去核、切塊一打漿一自然酒精發(fā)酵優(yōu)質菌株的分類鑒定及性能等方面已經(jīng)做了大量的研一自然醋酸發(fā)酵一菌源一增殖培養(yǎng)一稀釋平板分離一究工作。初篩一斜面培養(yǎng)一純化一斜面保藏菌株。1材料與方法1．2．2菌種的形學鑒定1．1材料1．2．2．1菌落形態(tài)觀察：利用劃線分離法以及簡1．1．1菌種來源單染色法進行觀察。市購殘次水果，洗凈污垢，打漿，置于實驗室，進行1．2．2．2鞭毛生長情況的察：半固體直立柱穿自然酒精發(fā)酵和醋酸發(fā)酵。待發(fā)酵醪液形成刺激性醋
5、刺線上群體生長是否擴散來判斷。味時，開始從中篩選天然的醋酸菌種。1．2．2．3革蘭氏染色：用細菌的革蘭氏染色法觀1．1．2儀器設備察顏色(注：做革蘭氏染色的菌的培養(yǎng)不能超過24h，以電子天平AE一100型(梅特勒一托利多上海公免出現(xiàn)假陰性)。司)；離心機LD5—2A型(北京醫(yī)用離心機廠)；臺式干1．2．3菌株的特殊生理特征實驗燥箱(中國重慶)；顯微鏡(江西鳳凰光學儀器有限公1．2．3．1葡萄糖的氧化發(fā)酵測定司)；生化培養(yǎng)箱LRH一250A型(廣東省醫(yī)療器械廠)；用18—24h的幼齡菌做種子，穿刺接種于休和利超凈工作臺(
6、蘇凈集團安泰公司制造)；電熱恒溫水浴夫森二氏培養(yǎng)基，每株4支。其中兩支用滅菌的凡士鍋(上海精密實驗設備有限公司)；LS—B501滅菌鍋林油封蓋，約0．5一lear厚，以隔絕空氣為閉管。另兩(上海華線醫(yī)用核子儀器有限公司)；ZHWY一2112B恒只為開管。同時還要有不接種的閉管作對照。將試管溫搖床(上海智城分析儀器制造有限公司)等。置于3O℃的溫箱內培養(yǎng)1，2，4，7，14d觀察結果。(注：1．1．3培養(yǎng)基本試驗可同時觀察細菌的運動性。)增殖培養(yǎng)基”、分離培養(yǎng)基、斜面培養(yǎng)基、休1．2．3．2乙醇的氧化2014年3月優(yōu)良醋
7、酸菌的分離鑒定91接種兩環(huán)菌株P一7于乙醇氧化培養(yǎng)基試管中，置1．2．3．9淀粉水解試驗于3O℃的溫箱內培養(yǎng)內培養(yǎng)1，2，4，7，14d觀察產(chǎn)酸變在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加人0．2％的可溶性淀黃者為陽性，不變黃者為陰性。粉，0．1Mpa滅菌20min后，倒平板，用接種環(huán)將菌株P1．2．3．3乙酸的氧化一7使用劃線法接種于此培養(yǎng)基平板上，置于30℃的觀察培養(yǎng)分離培養(yǎng)基上的細菌生長狀況，置于溫箱內培養(yǎng)4d。觀察菌體生長情況，將平皿蓋打開，滴30~C的溫箱內培養(yǎng)內2d，能使CaCO，形成白色透明圈，入少量Lugol’s碘液于平
8、皿中，輕輕旋轉平皿，使碘液繼續(xù)培養(yǎng)2，3，5，7天，乙酸將進一步氧化分解，產(chǎn)生均勻鋪滿整個平皿。如菌臺周圍出現(xiàn)無色透明圈，說CO和水，菌落周圍出現(xiàn)白色暈圈者為陽性否則為陰明淀粉已被水解，為陽性。透明圈的大小可初步判斷性。該菌水解淀粉能力的強弱。1．2．3．4接觸酶試驗1．2．3．10產(chǎn)葡萄糖酸試驗將菌株P一7接種于牛肉膏蛋白胨斜面
