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1、層析CHROMATOGRAPHY掌握：層析的概念、一般原理凝膠層析的基本原理裝層析柱的過(guò)程及裝柱要求熟悉：層析技術(shù)的分類(lèi)凝膠層析的特點(diǎn)凝膠的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)了解：凝膠的選擇柱、樣品、洗脫液的選擇凝膠的保存一.概述層析Chromatography(色譜),利用混合物中各組分的物理化學(xué)性質(zhì)間的差異(溶解度、分子極性、分子大小、分子形狀、吸附能力、分子親合力等)，使各組分在支持物上集中分布在不同區(qū)域，借此將各組分分離。色譜歷史古羅馬人分析混合染料（類(lèi)似輻射紙色譜）1903（1906）年，MichaelTswett提出色譜法1931年，Kuhn采用柱色譜分離了類(lèi)胡蘿卜素1941
2、年，Martin和Synge提出分配色譜法1944年，Martin等又提出紙色譜法1952年，Martin和James發(fā)明了氣液色譜法1955年，第一臺(tái)商品氣相色譜問(wèn)世，標(biāo)志著現(xiàn)代色譜分析的建立1956年，Stahl系統(tǒng)研究了薄層色譜法(TLC)1958年，Stein和Moore研制出氨基酸分析儀，確定了核糖核酸的分子結(jié)構(gòu)1967年，Horvvath和Huber等研制了高效液相色譜(high-performanceliquidchromatography,HPLC)儀1975年，Small等提出離子色譜20世紀(jì)80年代，超臨界色譜20世紀(jì)90年代，毛細(xì)管電泳（18
3、09年Re?ss第一次電泳實(shí)驗(yàn)）21世紀(jì)，聯(lián)用技術(shù)、大分子色譜分離、制備色譜可望取得更大的發(fā)展層析法進(jìn)行時(shí)有兩個(gè)相，一個(gè)相稱(chēng)為固定相(Stationaryphase)，另一相稱(chēng)為流動(dòng)相(Mobilephase)。由于各組分所受固定相的阻力和流動(dòng)相的推力影響不同，各組分移動(dòng)速度也各異，從而使各組分得到分離。二.層析技術(shù)的分類(lèi)1.按兩相所處的狀態(tài)分類(lèi)以液體作為流動(dòng)相的層析稱(chēng)為液相層析，以氣體作為流動(dòng)相的稱(chēng)為氣相層析。其固定相也可有兩種狀態(tài)，一種是以固體作為吸附劑的固定相，另一種是以涂布在固體載體表面的液體作為固定相。層析氣相層析（gas-chromatography）
4、液相層析（liquid-chromatography）氣-固層析（gas-solidchromatography）氣-液層析（gas-liquidchromatography）液-固層析（liquid-solidchromatography）液-液層析（liquid-liquidchromatography）2.按層析過(guò)程的機(jī)制可分為?.吸附層析(adsorptionchromatography)----利用吸附劑對(duì)不同組分吸附能力的不同加以分離的方法。?.分配層析(partitionchromatography)----利用不同組分在流動(dòng)相和固定相中的分配系數(shù)不
5、同而進(jìn)行分離的方法。?.離子交換層析（ion-exchangechromatography）----利用離子交換劑與各組分之間的離子親和力不同而進(jìn)行層析分離的方法。?.凝膠層析（gelchromatography）----利用不同組分之間分子大小不同，在通過(guò)凝膠介質(zhì)時(shí)所受到的阻滯作用的差異而進(jìn)行分離的方法。?.親和層析（affinitychromatography）----利用生物大分子之間特有親和力的不同進(jìn)分離純化的方法。3.按操作技術(shù)形式分類(lèi)?.柱層析（columchromatography）----將固定相裝在層析柱中，使樣品朝著一個(gè)方向移動(dòng)，通過(guò)各組分隨流
6、動(dòng)相流動(dòng)而得到分離的方法。?紙層析（paperchrmatography）----用紙作為液體的載體，樣品點(diǎn)在紙上隨后展開(kāi)達(dá)到分離鑒定的方法。?.薄層層析（thinlayperchromatography）----將適當(dāng)?shù)奈絼┰诓ＡО寤蚱渌牧媳“迳箱伋杀?，樣品點(diǎn)在上面隨后用流動(dòng)相展開(kāi)達(dá)到分離鑒定的方法。三.層析的一般原理1.分配系數(shù)(Partitionchromatography)混合物在層析過(guò)程中不管層析技術(shù)采用哪兩種狀態(tài)的相(流動(dòng)相和固定相)都能達(dá)到分配平衡，用來(lái)敘述一種物質(zhì)在兩種特定相中的分配程度是用分配系數(shù)表示的。分配系數(shù)----是一種物質(zhì)在兩種特定
7、相中分配，在特定的溫度時(shí)這個(gè)系數(shù)的值是一個(gè)常數(shù)，即:溶質(zhì)在固定相中的濃度CsK=————————————=——溶質(zhì)在流動(dòng)相中的濃度Cm有效分配系數(shù)：定義為化合物在一個(gè)相的總量除以另一個(gè)相中的總量。實(shí)際上是分配系數(shù)乘以?xún)蓚€(gè)相的體積比。在不同的層析機(jī)制中,分配系數(shù)K的含義不同,在吸附層析中,K為吸附平衡常數(shù);在分配層析中,K為分配系數(shù);在離子交換層析中K為交換常數(shù).分配系數(shù)K值大,說(shuō)明物質(zhì)在層析中被固定相吸附得比較牢固,隨流動(dòng)相遷移的速度較慢,留在固定相中的時(shí)間較長(zhǎng),在洗脫液中后出峰。若分配系數(shù)K值小，則該物質(zhì)在洗脫液中較早出峰。從一個(gè)混合物中分離和純化一種生物物質(zhì)的
8、純度如何，
