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1、層析CHROMATOGRAPHY掌握：層析的概念、一般原理凝膠層析的基本原理裝層析柱的過程及裝柱要求熟悉：層析技術(shù)的分類凝膠層析的特點凝膠的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)了解：凝膠的選擇柱、樣品、洗脫液的選擇凝膠的保存一.概述層析Chromatography(色譜),利用混合物中各組分的物理化學(xué)性質(zhì)間的差異(溶解度、分子極性、分子大小、分子形狀、吸附能力、分子親合力等)，使各組分在支持物上集中分布在不同區(qū)域，借此將各組分分離。色譜歷史古羅馬人分析混合染料（類似輻射紙色譜）1903（1906）年，MichaelTswett提出色譜法1931年，Kuhn采用柱色譜分離了類胡蘿卜素1941年，Martin
2、和Synge提出分配色譜法1944年，Martin等又提出紙色譜法1952年，Martin和James發(fā)明了氣液色譜法1955年，第一臺商品氣相色譜問世，標(biāo)志著現(xiàn)代色譜分析的建立1956年，Stahl系統(tǒng)研究了薄層色譜法(TLC)1958年，Stein和Moore研制出氨基酸分析儀，確定了核糖核酸的分子結(jié)構(gòu)1967年，Horvvath和Huber等研制了高效液相色譜(high-performanceliquidchromatography,HPLC)儀1975年，Small等提出離子色譜20世紀80年代，超臨界色譜20世紀90年代，毛細管電泳（1809年Re?ss第一次電泳實驗）
3、21世紀，聯(lián)用技術(shù)、大分子色譜分離、制備色譜可望取得更大的發(fā)展層析法進行時有兩個相，一個相稱為固定相(Stationaryphase)，另一相稱為流動相(Mobilephase)。由于各組分所受固定相的阻力和流動相的推力影響不同，各組分移動速度也各異，從而使各組分得到分離。二.層析技術(shù)的分類1.按兩相所處的狀態(tài)分類以液體作為流動相的層析稱為液相層析，以氣體作為流動相的稱為氣相層析。其固定相也可有兩種狀態(tài)，一種是以固體作為吸附劑的固定相，另一種是以涂布在固體載體表面的液體作為固定相。層析氣相層析（gas-chromatography）液相層析（liquid-chromatograp
4、hy）氣-固層析（gas-solidchromatography）氣-液層析（gas-liquidchromatography）液-固層析（liquid-solidchromatography）液-液層析（liquid-liquidchromatography）2.按層析過程的機制可分為?.吸附層析(adsorptionchromatography)----利用吸附劑對不同組分吸附能力的不同加以分離的方法。?.分配層析(partitionchromatography)----利用不同組分在流動相和固定相中的分配系數(shù)不同而進行分離的方法。?.離子交換層析（ion-exchangec
5、hromatography）----利用離子交換劑與各組分之間的離子親和力不同而進行層析分離的方法。?.凝膠層析（gelchromatography）----利用不同組分之間分子大小不同，在通過凝膠介質(zhì)時所受到的阻滯作用的差異而進行分離的方法。?.親和層析（affinitychromatography）----利用生物大分子之間特有親和力的不同進分離純化的方法。3.按操作技術(shù)形式分類?.柱層析（columchromatography）----將固定相裝在層析柱中，使樣品朝著一個方向移動，通過各組分隨流動相流動而得到分離的方法。?紙層析（paperchrmatography）---
6、-用紙作為液體的載體，樣品點在紙上隨后展開達到分離鑒定的方法。?.薄層層析（thinlayperchromatography）----將適當(dāng)?shù)奈絼┰诓ＡО寤蚱渌牧媳“迳箱伋杀?，樣品點在上面隨后用流動相展開達到分離鑒定的方法。三.層析的一般原理1.分配系數(shù)(Partitionchromatography)混合物在層析過程中不管層析技術(shù)采用哪兩種狀態(tài)的相(流動相和固定相)都能達到分配平衡，用來敘述一種物質(zhì)在兩種特定相中的分配程度是用分配系數(shù)表示的。分配系數(shù)----是一種物質(zhì)在兩種特定相中分配，在特定的溫度時這個系數(shù)的值是一個常數(shù)，即:溶質(zhì)在固定相中的濃度CsK=————————
7、————=——溶質(zhì)在流動相中的濃度Cm有效分配系數(shù)：定義為化合物在一個相的總量除以另一個相中的總量。實際上是分配系數(shù)乘以兩個相的體積比。在不同的層析機制中,分配系數(shù)K的含義不同,在吸附層析中,K為吸附平衡常數(shù);在分配層析中,K為分配系數(shù);在離子交換層析中K為交換常數(shù).分配系數(shù)K值大,說明物質(zhì)在層析中被固定相吸附得比較牢固,隨流動相遷移的速度較慢,留在固定相中的時間較長,在洗脫液中后出峰。若分配系數(shù)K值小，則該物質(zhì)在洗脫液中較早出峰。從一個混合物中分離和純化一種生物物質(zhì)的純度如何，
