搖瓶種子的制備及菌種的保藏2.ppt

《搖瓶種子的制備及菌種的保藏2.ppt》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。

1、主題二搖瓶種子的制備及菌種的保藏帶圖象分析系統(tǒng)的微生物菌種顯微觀察裝置第三節(jié)搖瓶種子的制備將斜面種子或米孢子接種入裝在錐形搖瓶(又稱三角搖瓶)內(nèi)的液體營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中，在搖床上振蕩培養(yǎng)得到的液體種子，就叫做搖瓶種子。搖瓶種子可以在搖瓶中傳代，第一代俗稱“母瓶”，第二代就叫做“子瓶”。母瓶或子瓶可用于生產(chǎn)上種子罐的接種，也常常作為搖瓶發(fā)酵試驗(yàn)的種子。1.搖瓶種子的制備工藝(1)工藝流程搖瓶種子的制備流程如圖5—l所示。斜面種子或米孢子培養(yǎng)基配制分裝滅菌接種恒溫振蕩培養(yǎng)搖瓶種子圖5—1搖瓶種子制備的工藝流程（2）培養(yǎng)基配制搖瓶種子以培養(yǎng)具有強(qiáng)生長(zhǎng)活性的營(yíng)養(yǎng)菌體為目的，因而在配制培養(yǎng)基

2、時(shí)必須全面、均衡地滿足菌體生長(zhǎng)對(duì)各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求，包括碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子等。搖瓶種子在培養(yǎng)過(guò)程中一般不便于調(diào)節(jié)pH，故在培養(yǎng)基成分的選擇時(shí)還應(yīng)考慮培養(yǎng)過(guò)程中pH的穩(wěn)定，可以通過(guò)生理酸、堿性物質(zhì)的平衡搭配及加入磷酸鹽、碳酸鈣之類緩沖劑來(lái)實(shí)現(xiàn)。分裝培養(yǎng)基的三角搖瓶用棉塞或泡沫塑料塞口，置高壓蒸汽鍋內(nèi)滅菌。滅菌結(jié)束后要緩慢降壓，以免培養(yǎng)基暴沸沖濕塞子。(3)接種搖瓶種子的接種一般采用斜面種子挖塊法或米孢子粒計(jì)數(shù)接人法。這種接種法難于掌握一致的接種量，可能影響搖瓶種子質(zhì)量的穩(wěn)定。對(duì)接種量敏感的菌種，最好采用懸液接種法，即用無(wú)茵蒸餾水將斜面種子或米孢子粒上的細(xì)胞或孢子洗下，

3、制成細(xì)胞或抱子懸液，然后按一定體積或一定細(xì)胞(孢子)數(shù)接種至搖瓶種子培養(yǎng)基中。(4)培養(yǎng)搖瓶種子在恒溫室內(nèi)的搖床上進(jìn)行培養(yǎng)。搖床分旋轉(zhuǎn)式和往復(fù)式兩種?？股毓S常用的是旋轉(zhuǎn)式。這種搖床由于主動(dòng)軸和從動(dòng)軸之間有一個(gè)偏心距(一般為25～50mm)，從向而旋轉(zhuǎn)中產(chǎn)生振蕩作用，以利于培養(yǎng)時(shí)氣體交換。為了使搖瓶中的水分蒸發(fā)量保持穩(wěn)定，恒溫室也應(yīng)控制一定的濕度。(5)保存搖瓶種子應(yīng)當(dāng)在培養(yǎng)成熟后立即使用。如果暫時(shí)不用，可置4℃冰箱中保存，保存期最好不超過(guò)3d。經(jīng)過(guò)保存的搖瓶種子一般不用做生產(chǎn)種子，可用于搖瓶發(fā)酵實(shí)驗(yàn)或小型發(fā)酵罐實(shí)驗(yàn)。2．搖瓶種子的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)搖瓶種子是液體培養(yǎng)的種子，在質(zhì)量的

4、控制方面，除了保證不污染雜菌及生產(chǎn)能力高這類與固體培養(yǎng)種子相同的一般標(biāo)準(zhǔn)外，還有其特殊標(biāo)準(zhǔn)。(1)菌體濃度(2)菌體生長(zhǎng)階段(1)菌體濃度搖瓶種子以培養(yǎng)強(qiáng)生命力的營(yíng)養(yǎng)菌體為目的，因而優(yōu)良的搖瓶種子，首先要有一定的活菌體量。在一定的體積接種之下，活菌量越多，意味著至下一級(jí)種子的接種量越大，下一級(jí)種子的生長(zhǎng)就越快，生長(zhǎng)質(zhì)量一般也越好。菌體濃度也不能太高，否則將影響搖瓶中的混合和氣體交換，降低菌體生長(zhǎng)質(zhì)量。（2）菌體生長(zhǎng)階段為了使搖瓶種子有較強(qiáng)的生長(zhǎng)活力，同時(shí)又滿足上述達(dá)到較高菌體濃度的要求，應(yīng)將搖瓶種子的菌體生長(zhǎng)階段控制在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的后期。這一菌體生長(zhǎng)階段，本應(yīng)由測(cè)得的菌體濃度變化

5、曲線來(lái)確定，但搖瓶系統(tǒng)取樣監(jiān)測(cè)不現(xiàn)實(shí)，且測(cè)量結(jié)果滯后，通常只憑在一定培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)外觀稠度的觀察、靜置沉降量或離心濕菌體積的測(cè)定以及顯微鏡檢查的結(jié)果進(jìn)行判斷。3.影響搖瓶種子質(zhì)量的因素及其控制影響斜面種子質(zhì)量的各種因素一般也影響搖瓶種子的質(zhì)量。除此以外，還有以下一些因素必須予以注意。（1）培養(yǎng)基組成（2）搖瓶裝量（3）搖床轉(zhuǎn)速（4）搖瓶在搖床中的位置（1）培養(yǎng)基組成培養(yǎng)基組成應(yīng)能均衡地滿足營(yíng)養(yǎng)菌體生長(zhǎng)對(duì)所有營(yíng)養(yǎng)成分的需要。在這一前提下，培養(yǎng)基組成越豐富，所能獲得的菌體濃度就越高。如果由于某一必需營(yíng)養(yǎng)成分不足而打破了這種均衡，那么其它營(yíng)養(yǎng)成分的豐富不僅不能促進(jìn)菌體的生長(zhǎng)，反而因代謝

6、的失衡引起pH的波動(dòng)或(和)毒性中間代謝產(chǎn)物的積累，而降低菌體濃度。（2）搖瓶裝量搖瓶裝量影響搖瓶?jī)?nèi)的通氣效果；裝量越小，通氣效果越好。對(duì)搖瓶種子培養(yǎng)最合適的裝量，隨抗生素產(chǎn)生菌耗氧特性和搖床轉(zhuǎn)速而異，應(yīng)當(dāng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定。一般情況下，250、500mL和750mL搖瓶的裝量分別為40～50、60～80mL和80～100mL，基本上可以滿足各種抗生素?fù)u瓶種子培養(yǎng)的要求。（3）搖床轉(zhuǎn)速搖床轉(zhuǎn)速越高，偏心距越大，搖瓶?jī)?nèi)的氣體交換速度就越快。我國(guó)設(shè)計(jì)的搖床，一般偏心距為25mm，轉(zhuǎn)速為200～300r／min。但在使用中應(yīng)經(jīng)常檢查傳動(dòng)皮帶的松緊，皮帶過(guò)松將使轉(zhuǎn)速顯著下降，從而影響搖瓶

7、通氣效果的搖瓶種子的培養(yǎng)。（4）搖瓶在搖床中的位置由于代謝熱和機(jī)械振蕩熱的生成，搖床瓶?jī)?nèi)的溫度必然高于搖床室室溫。在搖床的不同位置，這種溫差存在明顯的差異。搖床上層的溫度高于下層，中間的溫度高于邊緣。由于這種差異，使在不同位置上培養(yǎng)的搖瓶種子呈現(xiàn)不同的菌體生長(zhǎng)濃度和生長(zhǎng)階段，造成種子質(zhì)量的波動(dòng)。為了避免這種波動(dòng)，搖瓶種子的培養(yǎng)最好在具有相同溫度帶的搖床固定位置上進(jìn)行。4．孢子接入量對(duì)于絲狀菌來(lái)說(shuō)，孢子接入量對(duì)搖瓶種子的質(zhì)量及其后的抗生素生產(chǎn)有很大的影響。接入孢子量過(guò)少，延緩種子的生長(zhǎng)及發(fā)酵前期的產(chǎn)物合成