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《實(shí)驗(yàn)二-細(xì)胞內(nèi)糖原、蛋白質(zhì)及核酸的顯示.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、實(shí)驗(yàn)二細(xì)胞內(nèi)糖原、蛋白質(zhì)及核酸的顯示????????[實(shí)驗(yàn)?zāi)康腯1.熟悉糖原、蛋白質(zhì)、核酸在細(xì)胞內(nèi)的主要存在部位。2.了解細(xì)胞內(nèi)糖原、蛋白質(zhì)、核酸顯示的原理和方法。3.進(jìn)一步掌握顯微鏡的使用方法。???????[實(shí)驗(yàn)用品]1.材料：土豆、洋蔥、肝糖原切片、蟾蜍。2.器材：顯微鏡、載（蓋）玻片、刀片、小鑷子、解剖剪刀、染色缸、染色架。3.試劑：革蘭氏碘液、5%三氯醋酸、固綠染液、甲基綠·派洛寧染液、carnoy固定液、酒精、丙酮。????????[實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法]???一、糖原淀粉的顯示（一）原理糖原和淀粉是生物有機(jī)體生命活動(dòng)能量的主要來(lái)源。淀粉是一種植物多糖，貯藏于植物的種子、塊莖、塊根中
2、。淀粉遇碘呈藍(lán)色，這是由于碘被吸附在淀粉上，形成一復(fù)合物—碘化淀粉。碘化淀粉是不穩(wěn)定的，極易被醇、氫氧化鈉和熱分解，因而使顏色褪去。其它多糖大多能與碘呈特異的顏色反應(yīng)，這些呈色物質(zhì)不穩(wěn)定。糖原又稱動(dòng)物淀粉，是動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)貯藏能量的多糖類物質(zhì)。在肝臟中尤為豐富?？捎眠^(guò)碘酸雪夫試劑反應(yīng)（periodicacidschiffreaction），簡(jiǎn)稱pas反應(yīng)檢測(cè)。含乙二醇基的多糖在高碘酸的作用下氧化而產(chǎn)生雙醛基，醛基進(jìn)而與schiff氏液反應(yīng)，使其中的無(wú)色品紅變成紫紅染料而附于含糖的組織上，著色的部分即為肝糖原。（二）試劑配制革蘭氏碘液：稱碘化鉀1g，溶于50ml蒸餾水中，再加0.5g碘使之溶解。
3、最后用蒸餾水稀釋至150ml，盛于棕色瓶?jī)?nèi)，保存暗冷處。（三）方法1.淀粉（1）馬鈴薯徒手切片。（2）取一薄片放在載玻片上，用吸管吸取革蘭氏碘液一滴于馬鈴薯薄片上，蓋上蓋玻片。（3）置光學(xué)顯微鏡低倍鏡下觀察。可見(jiàn)在多角形的薄壁細(xì)胞中，有許多橢圓形藍(lán)色的顆粒，即為淀粉粒。2.糖原：在光鏡下觀察肝糖原切片（schiff氏反應(yīng)肝組織切片），可見(jiàn)肝細(xì)胞略呈多角形，中央有1～2個(gè)染成藍(lán)色圓形的細(xì)胞核。在細(xì)胞質(zhì)中可見(jiàn)許多紫紅色的小顆粒，即為肝糖原，如圖2-1。圖2-1肝細(xì)胞的糖原1.糖原顆粒?2.細(xì)胞核二.細(xì)胞內(nèi)酸性蛋白質(zhì)和堿性蛋白質(zhì)的顯示（一）原理蛋白質(zhì)的基本組成單位是氨基酸，是兩性電解質(zhì)。隨著溶液
4、ph值的不同，蛋白質(zhì)可離解為正離子、負(fù)離子或兩性離子，如果在某一ph值時(shí)，蛋白質(zhì)顆粒上所帶的正、負(fù)電荷總數(shù)相等，在電場(chǎng)中既不向正極移動(dòng)也不向負(fù)極移動(dòng)，這時(shí)溶液的ph值即為該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。由于蛋白質(zhì)的游離基團(tuán)除了末端氨基和末端羧基外，還有許多側(cè)鏈，其上許多集團(tuán)在溶液中也可以電離，因此，一個(gè)蛋白質(zhì)分子表面四周都有電荷。不同蛋白質(zhì)分子所帶有的堿性氨基酸和酸性氨基酸的數(shù)目不等，它們的等電點(diǎn)也不一樣。因此蛋白質(zhì)分子所帶的靜電荷既受所在溶液的ph值的影響，也取決于蛋白質(zhì)分子組成中堿性氨基酸和酸性氨基酸的含量。在生理?xiàng)l件下，整個(gè)蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷多，為酸性蛋白質(zhì)（等電點(diǎn)偏向酸性）；帶正電荷多，為堿性蛋白質(zhì)
5、（等電點(diǎn)偏向堿性）。所以，用不同ph值的固綠染液（一種弱酸性染料，本身帶負(fù)電荷）對(duì)細(xì)胞中的蛋白質(zhì)染色，可使細(xì)胞內(nèi)的酸性蛋白和堿性蛋白分別顯示。（二）試劑配制1.5%三綠醋酸液：稱取2.5g三綠醋酸溶于50ml蒸餾水中。2.染色液：（1）三種母液（實(shí)驗(yàn)前配制）a：0.2%固綠染液：取0.2%固綠溶于100ml蒸餾水中。b：1/75mol/lhcl(稀釋一倍后ph值為2.0～2.5)：取12mol/l的濃鹽酸0.11ml加入到98.89ml蒸餾水中混勻。c：0.05%碳酸鈉溶液（稀釋一倍后ph值為8.0～8.5）：稱取50mg碳酸鈉（na2co3）溶于100ml蒸餾水中，混勻。（2）兩種蛋白質(zhì)
6、染液（實(shí)驗(yàn)時(shí)混合）甲液：0.1%酸性蛋白固綠染液：母液a+b(1﹕1)，即為0.1%酸性固綠染液。（1/150mol/lhclph值為2.0～2.5）。乙液：0.1%堿性蛋白固綠染液：母液a+c（1﹕1），即為0.1%堿性固綠染液（0.025%na2co3?ph值為8.0～8.5)。(三)方法1.取材與涂片：將贍蜍用乙醚麻醉后，剪開(kāi)胸腔，打開(kāi)心包，小心地在心臟上剪一小口，取心臟血一小滴，滴在干凈載玻片右端，另取一邊緣光滑平齊的玻片作為推片，制作厚薄適中的血涂片。制成的涂片室溫晾干。每個(gè)同學(xué)制血涂片二張，并做好標(biāo)記。???注意：①取血滴不宜太大，以免涂片過(guò)厚，影響觀察。②要使涂片厚薄適中。注
7、意拿片姿勢(shì)，推片角度和速度要適中，要用力均勻。③涂片一般在后半部觀察效果較好。2.固定：將晾干的涂片浸于70%乙醇中固定5分鐘，取出后，室溫下晾干。3.三氯醋酸處理：將已固定的血涂片浸于5%三氯醋酸中60℃溫度處理30分鐘。取出后用清水沖洗3分鐘以上(注意一定要反復(fù)洗凈，不可在涂片上留下三氯醋酸痕跡，否則酸性蛋白和堿性蛋白的染色不能分明)。然后用濾紙吸干玻片上的水分。4.染色和鏡檢：將顯示酸性蛋白的涂片放入0.1%的酸性
