糖原的顯示PAS反應

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1、糖原的顯示(PAS反應)山東師范大學生命科學學院邢維賢實驗目的實驗原理實驗用品實驗方法與步驟實驗結(jié)果實驗報告目的要求通過PAS反應，了解糖原顯示的基本原理、方法以及糖原在細胞中的分布?；驹硖窃蒁-葡萄糖的分支或直鏈組成，在肝和肌肉最豐富。過碘酸是一種強氧化劑，能將葡萄糖中乙二醇基（CHOH-CHOH）氧化成二個游離醛基（—CHO），游離醛基與Schiff‘s試劑反應生成紫紅色產(chǎn)物，顏色深淺與多糖含量成正比。由于單糖在固定、脫水和包埋等組織化學操作過程中被抽提掉，故一般組織標本上所能顯示的糖類主要是多糖，包括糖原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白和糖脂等。因此要確定此紅色物質(zhì)是否糖原還需要同時進

2、行對照實驗。糖原可被唾液淀粉酶水解，先用唾液淀粉酶作用再進行PAS顯色，若反應為陰性，則表明是糖原，反之則為其他多糖。實驗用品1．器材：石蠟切片機，蓋玻片、載玻片、染色缸等．2．試劑0.5%過碘酸溶液；Schiff‘s試劑3．材料：小鼠肝臟石蠟切片切片經(jīng)二甲苯和各級酒精復水后，入0.5%的過碘酸溶液中作用15分鐘，取出后水洗。注意：過碘酸的氧化是整個實驗中最關鍵的步驟，過碘酸的作用時間與反應環(huán)境溫度有關，當室溫較高時，反應較快，過碘酸的作用時間應適當縮短，當室溫較低時，反應較慢，過碘酸的作用時間應適當延長。切片充分洗凈后入Schiff‘s試劑中進行顯色。作用15分鐘左右，將切片取出水洗，為

3、洗去非特異性著色，將切處理品入三級新配制的亞硫酸中進行沖洗，取出后水洗，鏡檢。對照片的設置為了確保實驗結(jié)果的可信性，在實驗中需設置陰性對照片。對照片在復水后，用唾液淀粉酶37℃水解30—60分鐘，取出后水洗，再入過碘酸處理。實驗結(jié)果實驗報告繪圖表示糖元在細胞中的分布情況；在實驗過程中，過碘酸處理能起到什么作用，它和Feulgen反應中HCl的作用有何異同？