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《大豆CYP78A5基因組織特異性啟動(dòng)子的克隆及表達(dá)分析-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、2014．1作物雜志Crops大豆CYP78A5基因組織特異性啟動(dòng)子的克隆及表達(dá)分析劉建偉陳曉峰劉廣富郭宗端李新柱胡兆平張亮。(濰坊科技學(xué)院，261000，山東濰坊；山東金正大生態(tài)工程股份有限公司，276700，山東臨沭國(guó)家緩控釋肥工程技術(shù)研究中心，276700，山東臨沭)摘要利用PCR技術(shù)從大豆中分離了終止，從而導(dǎo)致器官性狀變小。CYP78A5基因編CYP78A5基因的啟動(dòng)子，序列分析結(jié)果表明，擴(kuò)增碼一類(lèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，參與調(diào)節(jié)植物種子的大小，在片段大小為1650bp，與已報(bào)道序列的相應(yīng)區(qū)域同源植物種子生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中起著非常重要的作用，但性達(dá)99．2l％。
2、RT—PCR結(jié)果表明，CYP78A5在大豆目前對(duì)其上游調(diào)控序列的研究卻很少。不同組織中的表達(dá)存在差異，在未成熟種子中表達(dá)本研究利用PCR技術(shù)克隆得到了大豆量較高，在莖(上胚軸與下胚軸)中有微弱表達(dá)，而CYP78A5基因的啟動(dòng)子片段，并將其與GUS報(bào)告基在根和花組織中不表達(dá)。將該啟動(dòng)子片段與GUS因融合構(gòu)建重組表達(dá)載體，通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)報(bào)告基因融合，構(gòu)建植物表達(dá)載體，并采用農(nóng)桿菌介化煙草，對(duì)轉(zhuǎn)基因煙草植株進(jìn)行啟動(dòng)子的表達(dá)特性導(dǎo)法轉(zhuǎn)化煙草。轉(zhuǎn)基因煙草植株中GUS基因表達(dá)分析J，為進(jìn)一步研究CYP78A5基因的表達(dá)調(diào)控機(jī)分析和染色結(jié)果表明，CYP78A5啟動(dòng)子
3、可驅(qū)動(dòng)GUS制提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。報(bào)告基因在轉(zhuǎn)基因煙草莖中特異性表達(dá)，在根和葉1材料與方法器官中不表達(dá)。關(guān)鍵詞大豆；CYP78A5啟動(dòng)子；組織特異表1．1材料達(dá)；GUS檢測(cè)；遺傳轉(zhuǎn)化東北小黃豆(國(guó)家緩控釋肥工程技術(shù)研究中心)、植物表達(dá)載體pCAMBIA1301S、E．coliDH5oL菌植物器官大小受基因的調(diào)控。Adamski等在株及農(nóng)桿菌EHA105菌株(國(guó)家緩控釋肥工程技術(shù)擬南芥突變株中發(fā)現(xiàn)CYP78A5基因的功能缺失會(huì)研究中心)；克隆載體pMD19．T購(gòu)自寶生物工程有導(dǎo)致器官變小，而其過(guò)量表達(dá)則導(dǎo)致器官變大。對(duì)限公司；PCR產(chǎn)物回收試劑盒購(gòu)自O(shè)mega生
4、物技術(shù)該基因進(jìn)行克隆測(cè)序和結(jié)構(gòu)推斷，表明它屬于細(xì)胞公司；PCR引物由北京三博遠(yuǎn)志有限公司合成，測(cè)色素17450氧化酶系，可通過(guò)控制細(xì)胞分裂的時(shí)間長(zhǎng)序在大連寶生物公司完成。短而控制生長(zhǎng)。1．2方法CYP78A5基因是編碼擬南芥細(xì)胞色素P450單1．2．1RT—PCR分析用Trizol法抽提大豆根、上加氧酶的一個(gè)CYP78家族成員。這個(gè)基因在莖頂胚軸、下胚軸、花、未成熟種子等各組織RNA_6。。端分生組織的周緣區(qū)大量表達(dá)。在花器官發(fā)育時(shí)將抽提的RNA作為模板，利用TaKaRaPrimeScriptM期，CYP78A5的表達(dá)量不穩(wěn)定，過(guò)表達(dá)該基因會(huì)導(dǎo)1stStr
5、andeDNASynthesisKit反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cD—致細(xì)胞形態(tài)多樣化，從而導(dǎo)致莖的扭曲和花器官的NA。缺陷。CYP78A5缺失突變體klu造成花瓣、萼片、以反轉(zhuǎn)錄得到的eDNA產(chǎn)物作為模板，根據(jù)葉片和莖等地上器官發(fā)育過(guò)程中細(xì)胞有絲分裂提前CYP78A5基因的eDNA序列設(shè)計(jì)RT．PCR引物Rp-作者簡(jiǎn)介：劉建偉，助教，主要從事生物技術(shù)方面的教學(xué)與科研工作F和Rp-R，Actin基因引物為Aetin．F和Actin-R，序劉廣富為通信作者，工程師，研究方向?yàn)橹参飳W(xué)列見(jiàn)表1?；痦?xiàng)目：“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃資助項(xiàng)目“緩控釋肥產(chǎn)業(yè)化技術(shù)集成與示范”(
6、2011BAD11B02)；山東省自主創(chuàng)新專(zhuān)PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性5min，94oC變性項(xiàng)“精準(zhǔn)施肥信息化關(guān)鍵技術(shù)集成與示范”50s，50~C退火50s，72~C延伸1min30s，30個(gè)循環(huán)；(2012CX90202)收稿日期：2013—07—25，修回日期：2013—10—2372℃延長(zhǎng)10min。PCR產(chǎn)物置于1％瓊脂糖凝膠電54
