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《前納豆激酶原基因溫控型表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá)條件的研究-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、第34卷第1期內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)Vo1．34No．12013年1月JournalofInnerMongoliaAgriculturalUniversityJan．20l3前納豆激酶原基因溫控型表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá)條件的研究郭文秀，孫志，云華，陳宇飛(內(nèi)蒙古國(guó)際旅行衛(wèi)生保健中心，呼和浩特010020)摘要：納豆激酶(nattokinase，簡(jiǎn)稱NK)是一種枯草芽孢桿菌蛋白激酶，該酶具有強(qiáng)烈溶栓活性。本研究從枯草芽胞桿菌中分離純化得到基因組DNA作為模板，通過(guò)PCR擴(kuò)增前納豆激酶原基因，將其克隆到質(zhì)粒pUC19中，構(gòu)建重組克隆質(zhì)粒pNK并轉(zhuǎn)化大腸桿菌
2、DH5a，測(cè)序結(jié)果表明，所克隆片段全長(zhǎng)1152bp，與GenBank中已報(bào)道序列同源性達(dá)100％。將目的基因片段與表達(dá)載體pBV220連接，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pBNK，轉(zhuǎn)化大腸桿菌HB101。采用不同誘導(dǎo)時(shí)間、不同誘導(dǎo)溫度(40℃、42~C和44~C)誘導(dǎo)表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化菌pBNK6一HB101在IJB培養(yǎng)基中經(jīng)3O℃培養(yǎng)，42℃誘導(dǎo)表達(dá)7小時(shí)目的產(chǎn)物表達(dá)量達(dá)到最大，約占菌體總蛋白的25．35％，轉(zhuǎn)化菌pBNK6一HB101在不同的培養(yǎng)基(LB和TB)中培養(yǎng)，無(wú)明顯差異。關(guān)鍵詞：前納豆激酶原基因；枯草芽孢桿菌；克?。槐磉_(dá)中圖分類(lèi)號(hào)：Q785文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)
3、碼：A文章編號(hào)：1009—3575(2013)01—0066一O6CLONINGANDEXPRESSlONOFPRE—PRO—NATTOKINASEGENEGUOWen—xiu，SUNZhi，YUNHua，CHENYu—fei(InnerMongoliaInternationalHealthCareCenter，Huhhot010020，China)Abstract：Nattokinase．a(chǎn)kindofsubtilisin，whichhasstrongfibrinolyticactivity，iSasefineprotease．Thepre—pr
4、o—nattokinasegeneWasamolifledbyPCRfromgenomicDNAofBacillussubtilisandclonedintovectorpUC19．Sequenceanalysisshowedthattheclonedgenewas1152bpandshared100％homologywiththereportedsequenceinGenBank．Theclonedgenewasconstructedintoex—pressionvectorpBV220．Therecombinantexpressionvecto
5、rspBNKwasthentransformedintoEscherichiacoliHB101．Theresultsshowedthattheexpressionamountreachedthebiggestlevelat42℃for7hbycomparisonofdifferentinducingtimeanddiferentindu—cingtemperature(40~C，42℃and44℃)indicatingpBNK6一HB101，expressionoftargetproteinreachedupto25．35％oftotalDrot
6、einwhilethetransformedbacteriaHB101．ThebiggestexpressionleveloftransformedbacteriainLBmediuminducedfor7hwassimilartothatinTBmediumculturedat30℃andinducedat42oC。Keywords：Nattokinasegene：Bacillussubtilis；clone；expression血栓病是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的常見(jiàn)病、多發(fā)病。來(lái)源緊缺，價(jià)格昂貴，并發(fā)癥多等缺陷，因此，尋找和目前臨床上常用的一些預(yù)防和治
7、療血栓的藥物，如研制效果好、副作用小的溶栓治療藥物，對(duì)于更有效尿激酶、鏈激酶、組織纖溶酶原激活劑(t—PA)地治療嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的心腦血管疾病具有十分等由于存在有可能引起病人產(chǎn)生全身性內(nèi)出血，重要的意義。}收稿日期：2012—09—12作喜者器簡(jiǎn)界介：賽郭萋文妻秀，女，碩耋士，高鑫級(jí)i工藿程師，從穩(wěn)事茹微生物培22養(yǎng)；、檢測(cè)、監(jiān)測(cè)及分子生物學(xué)研究工作．·第1期郭文秀等：前納豆激酶原基因溫控型表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá)條件的研究67納豆激酶(nattokinase簡(jiǎn)稱NK)是在納豆發(fā)酵1．2．1_1枯草芽孢桿菌基因組DNA提取將枯草過(guò)程中由枯草芽孢桿菌
8、(Bacillussubtilis)產(chǎn)生的一芽孢桿菌在斜面培養(yǎng)基中進(jìn)行數(shù)次活化后接種人搖種單鏈多肽。1992年Nakamu
