液體發(fā)酵法發(fā)酵豆粕產(chǎn)蛋白酶條件的優(yōu)化-論文.pdf

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1、江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)2014年第42卷第8期·-——273·-——王偉，王世莫，朱寶成．液體發(fā)酵法發(fā)酵豆粕產(chǎn)蛋白酶條件的優(yōu)化[J]．江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42(8)：273—275液體發(fā)酵法發(fā)酵豆粕產(chǎn)蛋白酶條件的優(yōu)化王偉，王世英，朱寶成(河北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，河北保定071001)摘要：為了提高B—l5菌株發(fā)酵豆粕產(chǎn)蛋白酶能力，采用單因素法對(duì)B—l5菌株發(fā)酵培養(yǎng)基所需的碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽進(jìn)行篩選，采用正交試驗(yàn)對(duì)B—l5菌株的發(fā)酵培養(yǎng)基組成及發(fā)酵培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化，最終確定最適發(fā)酵培養(yǎng)基組成為葡萄糖為2％、豆粕濃度為12％、KC1為

2、0．01％、Mgs04為0．05％。通過(guò)發(fā)酵工藝條件參數(shù)的正交優(yōu)化試驗(yàn)得出發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳工藝參數(shù)為：發(fā)酵時(shí)間為48h，裝瓶量為50mL，種齡為14h，pH值為6．5。在此條件下B—l5菌株發(fā)酵產(chǎn)蛋白酶活力為125．05U／mL，與基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基相比，提高了11．9％。關(guān)鍵詞：液體發(fā)酵；發(fā)酵條件；正交優(yōu)化；蛋白酶活力中圖分類(lèi)號(hào)：TQ920．1文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1002—13o2(2014)08—0273—03大豆肽是一種比大豆蛋白質(zhì)更為優(yōu)質(zhì)、新型的大豆蛋白1．2試驗(yàn)方法酶改性產(chǎn)品，廣泛應(yīng)用于發(fā)酵、制藥、食品、化妝品、飼料

3、及植1．2．1菌種的培養(yǎng)與發(fā)酵物營(yíng)養(yǎng)劑等行業(yè)“。大豆肽易消化吸收，能迅速供給機(jī)體1．2．1．1搖瓶種子曲線(xiàn)(生長(zhǎng)曲線(xiàn))及種子培養(yǎng)將斜面培能量，無(wú)蛋白變性，無(wú)豆腥味，液體黏性小和受熱不凝固等，并養(yǎng)的菌株接種于NB培養(yǎng)基中，250mL三角瓶中的裝瓶量為具有降低血清膽固醇．、降低血壓、抗疲勞、抗氧化等許75mL(250mL，下同)，在37℃下180r／min振蕩培養(yǎng)，在零多生物功能，因此大豆肽成為研究熱點(diǎn)。目前，大豆肽多采用時(shí)開(kāi)始取樣，以后每隔1h或2h取樣1次，直至培養(yǎng)24h為酶解法和微生物發(fā)酵法生產(chǎn)，微生物發(fā)酵法把蛋白酶的發(fā)止，

4、以未接菌的培養(yǎng)基作空白調(diào)零，用分光光度計(jì)在600llm酵生產(chǎn)和大豆肽的酶解生產(chǎn)有機(jī)結(jié)合在一起，降低了大豆肽下測(cè)D，以發(fā)酵時(shí)間為軸、以D為，，軸作曲線(xiàn)，繪制生長(zhǎng)曲功能的生產(chǎn)成本，克服了酶水解法制備大豆肽產(chǎn)品的苦味大線(xiàn)。將斜面培養(yǎng)的菌株接種于NB培養(yǎng)基中，裝瓶量為和口感差等缺點(diǎn)J。目前，利用微生物發(fā)酵法生產(chǎn)大豆肽被75mL，180r／min搖床培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間由生長(zhǎng)曲線(xiàn)確定，得到認(rèn)為是較先進(jìn)有效方法，應(yīng)用前景較好。本試驗(yàn)以蛋白酶活種子液。力為指標(biāo)，通過(guò)單因素和正交試驗(yàn)對(duì)產(chǎn)蛋白酶芽孢桿菌1．2．1．2發(fā)酵培養(yǎng)對(duì)培養(yǎng)基成分采用以下的培養(yǎng)

5、條件進(jìn)B一15發(fā)酵處理豆粕的產(chǎn)酶培養(yǎng)基組成、發(fā)酵工藝條件進(jìn)行行優(yōu)化：將種子液以2％的接種量接入75mL／250mL三角瓶了優(yōu)化，以確定最佳的豆粕發(fā)酵產(chǎn)酶工藝，為大豆肽的大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基中，于37℃、180r／min下振蕩培養(yǎng)48h，將發(fā)酵液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。液在5000r／min條件下離心10min，棄去沉淀，收集上清液，進(jìn)行蛋白酶活力測(cè)定。1材料與方法1．2．2單因素試驗(yàn)1．1材料1．2．2．1不同碳源分別以2％的蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露1．1．1供試菌株細(xì)菌菌株：解淀粉芽孢桿菌(BaciUu~醇、可溶性淀粉、玉米淀粉

6、、D一果糖等7種碳源進(jìn)行B一15amyloliquefaciens)B一15，由河北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院制藥菌株產(chǎn)酶活力比較試驗(yàn)，配制7種碳源不同的發(fā)酵培養(yǎng)基，均工程實(shí)驗(yàn)室分離并保存。加入10％氮源豆粕，0．84％Na2HPO，0．032％KH2PO，1．1．2培養(yǎng)基NA培養(yǎng)基、NB培養(yǎng)基的配制詳見(jiàn)文獻(xiàn)0．17％CaCI2，混勻后調(diào)pH值6．0～6．5，篩選出最適碳源。[9]。種子培養(yǎng)基即NB培養(yǎng)基；基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基：豆粕I．2．2．2不同氮源濃度配制豆粕濃度分別為2％、5％、10％、Na2HPO40．84％、KH2PO40．0

7、32％、CaC120．17％、混勻8％、II％、14％的培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)，進(jìn)行B—l5菌株產(chǎn)酶活力后調(diào)pH值6．0—6．5。比較試驗(yàn)，均加入2％最適碳源，0．84％NaxHPO4、0．032％1，1．3試劑福林一酚試劑；O．55mol／L碳酸鈉溶液、10％KH2PO,、0．17％CaC1：，混勻后調(diào)pH值6．0—6．5，篩選出最三氯醋酸溶液、0．02mol／LpH值7．5磷酸緩沖液、1％酪蛋白適氮源濃度。溶液、100mL標(biāo)準(zhǔn)酪氨酸溶液，所用試劑皆為分析純。1．2．2。3不同無(wú)機(jī)鹽以濃度為0。o5％的CaC1：、MgSO、YeSO

8、、MnC12、KC1、NaCI、ZnC12等7種供試無(wú)機(jī)鹽進(jìn)行B一15菌株產(chǎn)酶活力比較試驗(yàn)，配制7種無(wú)機(jī)鹽不同的發(fā)酵培養(yǎng)基，收稿日期：2013—1O一09均加入2％最適碳源，最適氮源濃度的豆粕，0．84％基金項(xiàng)目：河北省科技支撐計(jì)劃(編號(hào)：11225525)。Na2HPO、0