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《2型登革病毒誘導(dǎo)raw264.7細胞凋亡的機制及凋亡對病毒復(fù)制的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、理雜志ChineseJournalofPathophysiology20()至絲·2245·[文章編號]1000—4718(2013)12—2245—062型登革病毒誘導(dǎo)RAW264．7細胞凋亡的機制及凋亡對病毒復(fù)制的影響木張林，黃俊琪(中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)研究所，教育部熱帶病防治研究重點實驗室，廣東廣州510080)[摘要】目的：探討2型登革病毒(DENV2)感染能否誘導(dǎo)RAW264．7細胞凋亡，并初步探討凋亡對病毒復(fù)制的影響。方法：用DENV2感染RAW264．7細胞，MTF檢測細胞活性，Hoechst33
2、342染色檢測細胞核變化，An-nexinV．FITC／PI雙染流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡，Westernblotting檢測caspase一3和caspase一8活化片段的變化，比色法檢測caspase．9活性變化，JC．1染色檢測線粒體膜電位變化，Z—VAD—FMK抑制細胞凋亡后以TCID。檢測感染細胞上清病毒滴度。結(jié)果：DENV2感染RAW264．7細胞24h、36h及48h后細胞活性受到抑制，免疫熒光檢測有核固縮現(xiàn)象，流式細胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)病毒感染誘導(dǎo)了細胞凋亡，Westernblotting檢測發(fā)現(xiàn)活化caspa
3、se一3和caspase一8的表達增加，caspase-9活性也增加，JC．1染色發(fā)現(xiàn)病毒感染誘導(dǎo)RAW264．7細胞線粒體膜電位降低，用Z—VAD—FMK抑制凋亡后感染細胞上清病毒滴度增加。結(jié)論：登革病毒感染可以通過內(nèi)、外源性途徑誘導(dǎo)RAW264．7細胞發(fā)生凋亡；凋亡發(fā)生抑制了病毒的產(chǎn)生。[關(guān)鍵詞]登革病毒；細胞凋亡；RAW264．7細胞[中圖分類號]R373．33[文獻標志碼】Adoi：10．3969／j．issn．1000—4718．2013．12．021Denguevirustype2inducesapop
4、tosisofRAW264．7cellsandefectofapoptosisonvirusreplicationZHANGLin，HUANGJun．qi(InstituteofImmunology，ZhongshanSchoolofMedicine，SunYet—senUniversity，KeyLaboratoryofTropicalDiseaseCon-trol，MinistryofEducation，Guangzhou510080，China．E—mail：huangiq@mail．sysu．edu．ca)
5、[ABSTRACT]AIM：Toexploretheapoptoticpathwayindenguevirustype2(DENV2)一infectedRAW264．7ceilsandtoanalyzetheeffectofapoptosisonvirusreplication．METHODS：RAW264．7cellswereinfectedwithDENV2．MTFassaywasusedtodetectthecellviability．ApoptosiswasassessedbyHoechst33342sta
6、iningandAnnexinV-FITC／PIstaining．Theexpressionlevelsofcaspase一3andcaspase-8weredeterminedbyWesternblotting．Theactivityofcaspase-9wasmeasuredwithacolorimetrickit．MitochondrialmembranepotentialwasevaluatedusingJC．1fluorescentstaining．TCID50wasusedtoestimatethein
7、fectiousvirionconcentrationafterusingZ—VAD—FMKtoinhibitapoptosis．RESULTS：TheviabilityofRAW264．7cellsdecreasedafterDENV2infectionat24h。36hand48h．Karyopyknosisindenguevirus．infectedceilswasobserved．Theproteinlevelsofcaspase一3andcaspase-8andtheactivityofcaspase一9
8、increasedintheap—optoticcellsafterdenguevirusinfection．Mitochondrialmembranepotentialwasreducedafterdenguevirusinfection．ThereWasahighervirionconcentrationinthecellcuhuremediumafte
