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《褐藻酸降解菌AGN12制備褐藻酸裂解酶的反應(yīng)條件.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、第25卷第3期大連輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報VoI.25，No.32006年9月JournalofDalianInstituteofLightIndustrySept.2006文章編號：1005-4014（2006）03-0187-03褐藻酸降解菌AGNl2制備褐藻酸”裂解酶的反應(yīng)條件張穎利，李憲臻（大連輕工業(yè)學(xué)院生物與食品工程學(xué)院，遼寧大連116034）關(guān)鍵詞：褐藻酸；褐藻酸裂解酶；反應(yīng)條件摘要：新分離菌AGN12能夠降解褐藻酸，具有褐藻酸裂解酶活性。褐藻酸裂解酶降解褐藻酸的最適反應(yīng)條件是：溫度30C，pH7.0，底物濃度8
2、g/L。褐藻酸裂解酶穩(wěn)定性對溫度高度敏感，50C2+2++保溫1h酶活力基本消失。Mn、Mg濃度高低對褐藻酸裂解酶均有激活作用，K在5mmoI/L濃2+3+度下對該酶有激活作用，而Cu、Fe對該酶具有抑制作用。中圖分類號：@557.1文獻標(biāo)識碼：AConditionofalginatelyasepreparationbyusingalginate-degradingAGNl2ZHANCYing-li，LIXian-zhen（SchooIofBioIogicaI&FoodstuffEngineering，DaIian
3、InstituteofLightIndustry，DaIian116034，China）Keywords：aIginate；aIginateIyase；reactionconditionAbstract：AIginateIyasepreparedbyusingaIginate-degradingAGN12degradestheaIginateintooIigosaccha-rides.TheoptimaIreactionconditionisfoIIows：temperature，30C；pH，7.0，aIgina
4、teconcentration，8g/L.ThethermostabiIityofaIginateIyaseispoor，theactivityofwhichisaImostIostat50Cfor1h.Itsactivity2+3+2+2++isinhibitedbyCu，F(xiàn)e，activatedbyMn，Mg，andaIsoincreasedbyKat5mmoI/L.褐藻酸是海帶的主要組分，由!-D-甘露糖醛1994年挪威人在14L罐中研究了海洋細(xì)菌高密度［7］酸和"-L-古羅糖醛酸通過!-1，4糖苷鍵連接形成
5、細(xì)胞培養(yǎng)的發(fā)酵工藝，最高酶產(chǎn)量為1330U/L。的線形陰離子多糖。褐藻酸廣泛應(yīng)用于食品、化國內(nèi)青島海洋大學(xué)韓寶芹等在海帶、裙帶菜病爛［1］工和醫(yī)藥等行業(yè)。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，褐藻酸處分離出海藻酸降解菌，對其發(fā)酵培養(yǎng)時的海藻降解產(chǎn)物具有多種生物學(xué)活性，如降血脂、降血酸酶形成條件進行了研究［8］。本文作者研究了［2-4］壓、促進植物生長等。褐藻酸降解菌能分泌褐新分離褐藻酸降解菌AGN12的發(fā)酵條件，并對裂藻酸裂解酶，通過!消除反應(yīng)切割聚甘露糖醛酸解酶的反應(yīng)條件進行了初步研究?；蚓酃帕_糖醛酸的!-1，4糖苷鍵，并在非還原末
6、［5］端產(chǎn)生C4，5不飽和雙鍵。這些還原末端不飽和1材料和方法雙鍵的產(chǎn)生對寡糖生物活性有重要影響，而物理、1.1菌種與培養(yǎng)基化學(xué)降解方法降解的產(chǎn)物卻沒有這些特性，因此褐藻酸降解菌AGN12，由腐爛海帶中分離褐藻酸裂解酶的研究成為褐藻寡糖制備方面研究開發(fā)的熱點［6］。1997年日本人報道海洋細(xì)菌H4得到。產(chǎn)生一種褐藻多糖裂解酶，同時具有poIy（M）和產(chǎn)酶培養(yǎng)基：褐藻酸鈉7.0g，（NH4）2SO4poI（yG）的降解活性。1995年法國人發(fā)現(xiàn)海洋細(xì)3.0g，NaCI5g，K2HPO40.5g，MgSO40.25g，
7、菌的酶在高鹽下具有活性，并在E.coli中表達(dá)。KNO30.7g，去離子水1000mL，pH7.0左右?！笔崭迦掌冢?006-03-06作者簡介：張穎利（1981~），女，碩士研究生.188大連輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報第25卷1.2酶生產(chǎn)物濃度的升高逐漸升高，在底物濃度8g/L時達(dá)將種子液按3%的比例接入產(chǎn)酶培養(yǎng)基，30C到最大值。恒溫培養(yǎng)241，將培養(yǎng)物在4C、8500r/min離心15min，取上清液作為粗酶液。［7］1.3褐藻酸裂解酶活力測定1mL用pH7.0磷酸緩沖溶液配制的10g/L褐藻酸鈉溶液于30C水浴中預(yù)熱1
8、0min，加入所制備的粗酶液1mL，30C水浴反應(yīng)30min后，立即于沸水浴中終止反應(yīng)。取0.3mL反應(yīng)液，加蒸餾水稀釋至3mL，在235nm處測定吸光值，空白管由1mL煮沸滅活的酶液代替。酶活力單位定義為：在上述實驗條件下，使235nm處吸光值增加0.1所需的酶量作為一個裂解酶活力單位（U）。圖2褐藻酸裂解酶最適底物濃度曲線2結(jié)果與討論2.4!"對酶反應(yīng)的
