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《環(huán)孢霉素A合成抗原的單抗制備技術(shù)探討.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版D2;(D:571~57JSichlanUniV(MedSciEdiD環(huán)孢霉素A合成抗原的單抗制備技術(shù)探討%陳米娜1范昕建1A魏大鵬2吳瓊英3馮萍1呂曉菊11.四川大學(xué)華西醫(yī)院傳染科(成都610041D;2.四川大學(xué)華西基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室;3.四川大學(xué)化工學(xué)院[摘要)目的研究利用自制的合成抗原制備環(huán)孢霉素A單克隆抗體的方法O方法利用光化學(xué)反應(yīng)將環(huán)孢霉素A與聚-L-賴氨酸偶聯(lián)為合成抗原,免疫BALB/c小鼠,將免疫后小鼠脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2/0進(jìn)行細(xì)胞融合,經(jīng)反復(fù)篩選亞克隆獲得抗CSA抗體的雜交瘤細(xì)胞株,以間接ELISA法進(jìn)
2、行抗體鑒定O結(jié)果獲得4株分泌抗CSA抗體的雜交瘤細(xì)胞株,其中2株分泌的抗體效價高,有一定特異性O(shè)結(jié)論該抗原合成和免疫的方法切實可行,但單克隆抗體制備及保存方法有待進(jìn)一步改進(jìn)O[關(guān)鍵詞)環(huán)孢霉素A聚-L-賴氨酸合成抗原單克隆抗體[中圖分類號)R392.116%OnPreparationtheMonoclonalAntibodyAgainstSyntheticAntigenofCyclosporineAChenMino,Fon%Xinjion,Weidopeng,Wuoiongying,Fengping,LUXiooju.Depcrtmentoffnfectzous
3、Dzsecse,WestchzncHospztc,SzchucnUnzUerszty,Chengdu610041,China[Abstract)ObjectiVeToStudythemethodSforpreparingthemonoclonalantibodyagainStSyntheticantigenofcycloSporineA.MethodsTheSeincludeduSingphotochemicalreactiontocouplecycloSporineAWithpoly-L-lySineaSSyntheticantigen,immunizingB
4、ALB/cmice,fuSingSpleencellSandSP2/0cellS.ThenhybridomacellSWererepeatedlyScreenedandSubcloned.ThemonoclonalantibodieSWereidentifiedbyindirectELISA.ReslltsFourhybridomacellSinSecretinganti-cycloSporineAmonoclonalantibodieSWereobtained.OnlytWoShoWedhightiterandSomeSpecificity.Concllsio
5、nsThemethodSofantigenSyntheSiSandimmunizationWerepracticable.ButthemethodSofantibodypreparationandpreServationneedtobeimproved.[KeyWords)CycloSporineAPoly-L-lySineSyntheticantigenMonoclonalantibody環(huán)孢霉素A(CSAD是新型的免疫調(diào)節(jié)劑,它不1.1.2SP2/0細(xì)胞由我校華西基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)僅廣泛應(yīng)用于各種器官和組織移植,還應(yīng)用于一些學(xué)院免疫學(xué)教研室提供O自身免疫性疾病[
6、1]O但其治療濃度范圍窄,藥代動力1.1.主要試劑環(huán)孢霉素A(CSA,由杭州中美學(xué)個體差異較大,其血藥濃度與療效及毒性密切相華東制藥有限公司提供D,聚-L-賴氨酸(PL,由美國關(guān),且其毒性反應(yīng)與排異反應(yīng)難以區(qū)別,故監(jiān)測Sigma公司提供D,HAT(次黃嘌呤H~氨基喋呤A~CSA濃度對于指導(dǎo)臨床合理用藥具有重要的意胸腺嘧啶核苷T由美國Sigma公司提供D,HRP標(biāo)義[2]O目前國內(nèi)主要用高效液相色譜法~放射免疫分記山羊抗小鼠IgG抗體(由美國Sigma公司提供DO析法~熒光偏振免疫分析法對其進(jìn)行檢測,但都有其1.2方法相應(yīng)的缺點及應(yīng)用的局限性,而利用單克隆抗體進(jìn)1
7、.2.1抗原合成將CSA與PL進(jìn)行交聯(lián),先利用行檢測具有相對明顯的優(yōu)勢[3]光化學(xué)反應(yīng)將CSA與4-苯甲酰苯甲酸(BBaD相連O目前尚無ELISA檢測CSA的藥盒O本研究就自制合成抗原免疫從而在CSA分子上引入羧基,再利用羧基與氨基的反應(yīng)將它與PL偶連成為大分子抗原物質(zhì)OBALB/c小鼠制備CSA抗體進(jìn)行了初步探討O1.2.2動物免疫對5只8~10周齡雌性清潔級1材料與方法純種BALB/c小鼠進(jìn)行免疫O初次免疫:弗氏不完全佐劑充分乳化后,每只小鼠背部皮下或皮內(nèi)多點1.1材料注射共0.2ml(約含CSA50HgDO3周后第二次免1.1.1動物8~10周齡雌性清潔級
8、純種BALB/疫,方法同
