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《糖類抗原19-9單抗制備及DAS-ELISA的建立-論文.pdf》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、中國免疫學(xué)雜志2014年第3O卷doi：10．3969／j．issn．1000-484X．2014．08．018糖類抗原19．9單抗制備及DAS．ELISA的建立①王云龍翟晉豫王繼創(chuàng)②程蕾②李玉林②葛新杰②毛烈②(河南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，新鄉(xiāng)453007)中圖分類號R446．6文獻(xiàn)標(biāo)志碼A文章編號1000-484X(2014)08-1088-05[摘要]目的：為制備糖類抗原199(Carbohydrateantigen19-9，CA19—9)特異性單克隆抗體。方法：以免疫后小鼠血清效價(jià)及其IC50值確定融合用小鼠，融
2、合、篩選獲得陽性雜交瘤細(xì)胞株。制備、收集并純化腹水抗體，紫外分光光度法測定抗體濃度；辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體后，篩選配對抗體建立DAS—ELISA檢測方法，并與國外檢測試劑盒進(jìn)行對比驗(yàn)證檢測性能。結(jié)果：細(xì)胞融合后獲得3株單抗細(xì)胞株(zJY1-2C8、ZJY2-7F10、ZJY3—1G9)，篩選確定ZJY3—1G9作為包被抗體、ZJY2-7F10作為酶標(biāo)抗體，成功建立DAS．ELISA檢測方法，最低檢測限為26．4U／ml。線性范圍為30～300U／ml。通過檢測病患血清33份，證實(shí)與國外試劑盒檢測的相關(guān)系數(shù)r=0．950
3、4。結(jié)論：所制備的單抗可用于CA19-9試劑盒的研制。[關(guān)鍵詞]CA19—9；單克隆抗體；DAS—ELISAPreparationagainstcarbohydrateantigen19-9monoclonalantibodiesandestab·lishment0fDAS．ELISAWANGYun一凡g，ZHAIfin—Yu，WANGJi—Chuang，CHENGLei，LIYu—Lin，GEXin—Jie，MAOLie．CollegeofLifeScience．HenanNormafUniversity．Xinxi
4、ang453007，China[Abstract]Objective：Topreparemonoclonalantibodyofcarbohydrateantigen19-9(CA19-9)．Methods：BasedonthetitertestresultsofmouseascitesanditsIC50values，themousethatprepareforfusionwasidentified．Positivemonoclonalcellstrainswereestablishedbycellfusingand
5、screening．Monoclonalantibodyfromasciteswasproducedbyperitonealinjectionmonoclonalcell，andthenpurifiedbyoctoicacid—ammoniumsulfateprecipitationmethod．AfterdeterminetheproteinconcentrationsbyUV—spectrophotometry，themonoclonalantibodyagainstCA19-9waslabelledwithhor
6、seradishperoxidase．Basedonantibodypairingtest，DAS—ELISAmethodwasestablished．Tocomparedwithabroadkit，analyzingperformanceofthismethod．Results：Threestrainsofmonoclonalantibodywereobtained．AndtheoptimalworkingconcentrationsofmAb(ZJY3—1G9)，ascoatedantibody，McAb(zjY2
7、—7FlO)，asHRP-IgG，wereassured．Limitofdetectionwas26．4U／m1．Linearrangewas30—300U／m1．BydetectingpatientswithselTIm33，confirmedthecorrelationcoeffieientofr=0．9504，comparedwithabroadkitthatmeasuresimultaneously．Conclusion：MonoclonalantibodypreparedforCA19-9canbeusedt
8、odevelopakit．[Keywords]CA19-9；Monoclonalantibody；DAS—ELISA1979年Koprowski等¨以結(jié)腸癌細(xì)胞株良好的特異性及敏感性，針對胰腺癌相關(guān)檢測陽性SW1116作為免疫原，獲得了多種特異性的單克隆率可以達(dá)到80％。因此，建立CA19-9的檢測對抗體。其中經(jīng)單克隆抗體ii16
