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《核桃青皮多糖超聲輔助提取工藝及抗氧化活性研究.doc》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、核桃青皮多糖超聲輔助提取工藝及抗氧化活性研究摘要：以多糖得率為指標(biāo)，水料比、提取時(shí)間、提取溫度為考察因素，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面法對核桃(JuglansregiaL.)青皮多糖超聲輔助提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，并對核桃青皮多糖清除輕基自由基和超氧陰離子自由基活性進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，核桃青皮多糖超聲輔助提取最佳工藝條件為：水料比18:1(V:m)、提取時(shí)間31min、提取溫度80°C、提取2次，在此條件下多糖得率為9.02%；核桃青皮多糖對輕基自由基及超氧陰離子自由基均有一定的清除活性，但其清
2、除作用小于維生素C。關(guān)鍵詞：核桃(JuglansregiaL.)青皮；多糖;超聲輔助提取；響應(yīng)面法；抗氧化活性中圖分類號：S664.1；0629.12文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：0439-8114(2014)05-1148-05多糖(Polysaccharide)是指聚合度超過10以上的多聚糖，是廣泛存在于動物、植物及微生物中的一類大分子化合物，具有許多重要的生物活性，如參與細(xì)胞骨架的構(gòu)成，同時(shí)它也是多種內(nèi)源性生物活性分子的組成成分［1］。研究發(fā)現(xiàn)，多糖具有抗腫瘤、抗衰老、抗感染、降血糖血脂、治療艾
3、滋病等功效［2］,其免疫調(diào)節(jié)作用是主要作用，所以又叫免疫活性多糖［引。目前，多糖已經(jīng)成為當(dāng)今醫(yī)藥研究領(lǐng)域的重要組成部分。核桃(JuglansregiaL.)是我國重要的經(jīng)濟(jì)林樹種之一［4］,我國核桃栽培面積及產(chǎn)量均居世界首位。核桃富含蛋白質(zhì)、維生素、亞油酸等［5］。在食用和生產(chǎn)過程中，核桃利用部位主要為其種仁,大量的青皮被廢棄，但現(xiàn)有研究顯示核桃青皮中也富含許多生物活性成分⑹。因此，如能從核桃青皮中提取具有免疫活性的多糖，可實(shí)現(xiàn)資源化利用。本研究對核桃青皮多糖的超聲輔助提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，并對其體
4、外抗氧化活性進(jìn)行了研究。1材料與方法1.1材料和試劑材料：核桃青皮2012年購于山西古縣，清洗干燥后粉碎，過60?80目篩，備用。試齊I」：AB-8大孔吸附樹脂、石油醍、三氯甲烷、正丁醇、無水乙醇、硫酸亞鐵、水楊酸、過氧化氫、三輕甲基氨基甲烷、鹽酸、鄰苯三酚、抗壞血酸，所用試劑均為分析純。1.2方法1.2.1多糖的提取參照劉眉等［7］的方法進(jìn)行多糖的提取，核桃青皮樣品經(jīng)石油醸回流脫脂后，加入一定體積的蒸懾水（水料比為5:1?25：1,V：m）,水?。?0?90°C）超聲提?。?0?90min）,
5、提取2次，過濾后合并濾液減壓濃縮，用Sevag法除去蛋白質(zhì)，3倍體積95%的乙醇沉淀多糖，真空干燥沉淀，即得到核桃青皮粗多糖。1.2.2多糖含量的測定采用蔥酮??硫酸法測定多糖的含量⑻，以葡萄糖作為標(biāo)準(zhǔn)品，采用紫外可見分光光度法在625nm波長下測定吸光度，以吸光度值（Y）為縱坐標(biāo)，葡萄糖濃度（X）為橫坐標(biāo)繪制葡萄糖溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到方程為Y=3.48X+0.0008,R2=0.9996。核桃青皮多糖得率為：R=ml/m2X100%式中ml為粗多糖中多糖質(zhì)量；m2為原料干重。1.2.3超聲輔助提
6、取核桃青皮多糖最佳條件的確定根據(jù)水料比、提取時(shí)間、提取溫度3個(gè)單因素試驗(yàn)所確定的水平范圍，應(yīng)用Design-Expert7.0軟件，根據(jù)Central-Composite中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，設(shè)計(jì)3因素3水平的響應(yīng)面試驗(yàn)，利用響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果，確定核桃青皮多糖的最佳提取條件，試驗(yàn)具體因素與水平見表lo1.2.4核桃青皮粗多糖的精制參照仰榴青等［9］、朱建飛等［10］的方法，準(zhǔn)確稱取按照“1.2.1”中方法制備的核桃青皮粗多糖400mg,溶于200mL蒸徭水中，過AB-8大孔吸附樹脂柱，蒸謂水洗脫2
7、00mL,流速1mL/mino將純化后的多糖溶液濃縮干燥至恒重，用于抗氧化活性的分析。1.2.5核桃青皮多糖抗氧化活性的測定1)清除羥基自由基活性的測定采用水楊酸法［口，12］測定輕基自由基的清除率。在10mL比色管中依次加入9mmol/LFeS04溶液2mL,9mmol/L水楊酸-乙醇溶液2mL和不同濃度的多糖或維生素C溶液2mL,8.8mmol/LH2O2溶液2mL。充分混勻后于37°C水浴30min,于波長510nm處測定吸光度，以加蒸謂水為空白對照，用以下公式計(jì)算疑基自由基的清除率：R=
8、［(Ao-Ai)/Ao］X100%式中，Ao表示空白對照的吸光度；Ai表示加入抗氧化劑體系的吸光度。1)清除超氧陰離子活性的測定采用鄰苯三酚自氧化法［2］測定超氧陰離子的清除率。將50mmol/LTris-HCl(pH8.2)的緩沖液4.5mL置于25°C水浴中預(yù)熱25min,依次加入不同濃度的多糖或維生素C溶液各1mL,2.5mmol/L鄰苯三酚溶液0.4mLo混勻后，在4min內(nèi)于波長325nm處每隔30s測定溶液的吸光度，計(jì)算鄰苯三酚溶液的吸光度隨時(shí)間的變化率K,以蒸謂水為空白對照，用以下
