電泳技術(shù)的現(xiàn)狀和發(fā)展

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1、中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志>??2年3月第>L卷第M期D017KN$*A()，&(".(:*(+>??2，O/%>L，P/QM·>J4··述評·電泳技術(shù)的現(xiàn)狀和發(fā)展沈霞早期的電泳技術(shù)是由瑞典!""#$%$大學(xué)物理化學(xué)系&’()*(+,教授提出了荷電的膠體顆粒在電場中移動的現(xiàn)象稱其為電泳（(%(-.+/"0/+(#1#）。于2345年，由6+7(81#(%19#教授———諾貝爾獎金獲得者，利用此電泳現(xiàn)象，發(fā)明了最早期的界面電泳（:/’17,*/97)$+;），用于蛋白質(zhì)分離的研究，開創(chuàng)了電泳技術(shù)的新紀元。此后，各種電泳技術(shù)及儀器相繼問世，先進的電泳儀和電泳技術(shù)的不斷

2、發(fā)展，使它在生物化學(xué)實驗技術(shù)中占重要地位，按電泳的原理有三種形式的電泳分離系統(tǒng)：原則上按電泳的原理來分，即移動界面電泳（:/’17,*/97)$+;(%(-.+/"0/+(#1#）、區(qū)帶電泳（

3、價值也各有差異。固體支持介質(zhì)可分為兩類：一類是濾紙、醋酸纖維素薄膜、硅膠、礬土、纖維素等；另一類是淀粉、瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠。由于它們具微細的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，故除能產(chǎn)生電泳作用外，還有分子篩效應(yīng)，小分子會比大分子跑得快而使分辨率提高。它的最大優(yōu)點是幾乎不吸附蛋白質(zhì)，因此電泳無拖尾的現(xiàn)象。低濃度的瓊脂糖電泳相當(dāng)于自由界面電泳，蛋白質(zhì)在電場中可自由穿透，阻力小，分離清晰，透明度高，能透過>??@5??7:波長的光線，故電泳結(jié)束后無須進行“透明”，可減少操作步驟及由此引起的實驗誤差，又因底板無色澤，也提高了對著色區(qū)帶的檢測敏感性，為此第一類支持介質(zhì)現(xiàn)已被第二類

4、支持介質(zhì)所替代。穩(wěn)態(tài)電泳或稱置換電泳的特點是分子顆粒的電泳遷移在一定時間后達到穩(wěn)態(tài)，如等電聚焦和等速電泳。區(qū)帶電泳是臨床檢驗領(lǐng)域中應(yīng)用最廣泛的技術(shù)，有重要臨床意義，尤其是結(jié)合了其他新技術(shù)，更擴大了其應(yīng)用范圍，提高了檢測技術(shù)，現(xiàn)對該技術(shù)的現(xiàn)狀與發(fā)展作一評述。一、正確解釋電泳結(jié)果，有助于臨床疾病判斷的參考新鮮血清經(jīng)電泳后可精確地描繪出患者蛋白質(zhì)的全貌，一般常見的是白蛋白降低，某個球蛋白區(qū)域升高，提示不同的臨床意義。如急性炎癥時，可見!2，!>區(qū)百分率升高；腎病綜合征、慢性腎小球腎炎時呈現(xiàn)白蛋白下降，!>球蛋白升高，"球蛋白也升高；缺鐵性貧血時可由于轉(zhuǎn)鐵蛋白的

5、升高而呈現(xiàn)"區(qū)帶增高，而慢性肝病或肝硬變呈現(xiàn)白蛋白顯著降低，#球蛋白升高>@4倍，示免疫球蛋白多克隆增高，甚至可見融合的"=#橋連現(xiàn)象，還可在#區(qū)呈現(xiàn)細而密的寡克隆區(qū)帶；對單一克隆漿細胞異常增殖所產(chǎn)生的無抗體活性的均一的免疫球蛋白稱A蛋白（:/7/-%/7$%"+/.(17）的檢測，血清蛋白電泳是其首選的實驗診斷方法?？稍陔娪緟^(qū)帶的!>@#區(qū)呈現(xiàn)致密而深染，高度集中的蛋白克隆增生區(qū)帶，稱其為A蛋白區(qū)帶，掃描后形成高而狹窄的單株峰，若此峰在#區(qū)其峰高與峰底寬之比B>C2，且由于正常免疫球蛋白合成限制造成背景染色淺。由A蛋白所導(dǎo)致的一組疾病如：多發(fā)性骨髓瘤、

6、巨球蛋白血癥、重鏈病、游離輕鏈病、半分子病、良性單株丙球血癥和雙A蛋白血癥等，目前這類疾病已不屬罕見。血清蛋白電泳對這類疾病的早期診斷，療效觀察和預(yù)后判斷均有十分重要的意義。二、電泳技術(shù)與免疫技術(shù)相結(jié)合，大大擴大了其臨床應(yīng)用的范圍讓電流來加速抗原與抗體的擴散并規(guī)定其運行方向，從而加快了沉淀反應(yīng)的速度。免疫電泳技術(shù)的種類很多，如：對流免疫電泳（DEFG）、火箭免疫電泳（HEF）、電免疫擴散（FEI）。在原有的幾種免疫電泳方法的基礎(chǔ)上，又不斷地派生出一些新的技術(shù)，如：免疫電泳（EFG）技術(shù)，23J3年6%"(+與K/07#/7推薦免疫固定電泳萬方數(shù)據(jù)作者單位

7、：>???3>上海第二醫(yī)科大學(xué)附屬新華醫(yī)院檢驗科·:’K·中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志:**$年%月第:K卷第)期=92MN6@O(P/，;PQRP,OPB:**$，S40:K，T4E)（!"#）是一種包括瓊脂糖凝膠蛋白電泳和免疫沉淀兩個過程的操作，是免疫沉淀反應(yīng)的一種混合技術(shù)，檢測標(biāo)本可以是血清、尿、腦脊液或其他體液。$%&’年血清免疫固定電泳（!"）技術(shù)再次被推薦，用于(蛋白的分型。血清蛋白質(zhì)在瓊脂糖凝膠介質(zhì)上經(jīng)電泳分離后，應(yīng)用固定劑和各型免疫球蛋白及其輕鏈抗血清，加于凝膠表面的泳道上，經(jīng)孵育讓固定劑和抗血清在凝膠內(nèi)滲透并擴散后，若有對應(yīng)的抗原存在，則在適當(dāng)位置

8、形成抗原抗體復(fù)合物并沉淀下來。電泳凝膠在洗脫液中漂洗，以除去未結(jié)合的蛋白質(zhì)，僅保