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《牛乳中金黃色葡萄球菌山東分離株(zfb)β-溶血素(hlb)的克隆,表達(dá)及溶血活性分析》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)2009,42(1):324-330ScientiaAgriculturaSinicadoi:10.3864/j.issn.0578-1752.2009.01.042牛乳中金黃色葡萄球菌山東分離株（zfb）β-溶血素(hlb)的克隆、表達(dá)及溶血活性分析1,2,3111112楊欽，王長法，楊宏軍，楊少華，高運(yùn)東，仲躋峰，彭廣能123（山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院奶牛研究中心，濟(jì)南250100；四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，四川雅安625014；山東省濰坊市昌樂縣畜牧局，山東濰坊262404）摘要：【目的】實(shí)現(xiàn)牛乳中金黃色葡萄球菌β
2、-溶血素在大腸桿菌中的高效表達(dá),并分析重組β-溶血素的溶血活性?！痉椒ā縋CR擴(kuò)增牛乳中金黃色葡萄球菌山東分離株β-溶血素基因，構(gòu)建原核表達(dá)載體pET32a+/hlb,并在大腸桿菌BL21（DE3）中誘導(dǎo)表達(dá)，用96孔血凝板測定重組蛋白的溶血效價，以血瓊脂平板法檢測重組蛋白的CAMP反應(yīng)?！窘Y(jié)果】測序結(jié)果表明，擴(kuò)增片段含有993bp的ORF，可編碼含330個氨基酸的成熟蛋白；SDS-PAGE分析重組蛋白表達(dá)水平，IPTG誘導(dǎo)后表達(dá)的融合蛋白分子量為57kD，表達(dá)量占菌體總蛋白的23.9%；溶血效價分析，-13-1金葡菌β-
3、溶血素對綿羊紅細(xì)胞的溶血效價為278HU·mg，對奶牛紅細(xì)胞的溶血效價為9×10HU·mg；重組蛋白在血瓊脂平板上和無乳鏈球菌能發(fā)生明顯的CAMP反應(yīng)?！窘Y(jié)論】成功表達(dá)了牛乳中金黃色葡萄球菌β-溶血素，該毒素對奶牛紅細(xì)胞的溶血活性明顯大于綿羊紅細(xì)胞，顯示出牛源金黃色葡萄球菌β-溶血素的特性明顯不同于人源金黃色葡萄球菌β-溶血素，為進(jìn)一步研究其致病與免疫機(jī)理、疫苗設(shè)計(jì)提供了理論基礎(chǔ)。此外，重組蛋白還可用來特異性診斷、鑒別無乳鏈球菌，為獸醫(yī)臨床診斷提供新的方法。關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌;β-溶血素；克隆；表達(dá)；溶血活性；CAMP
4、反應(yīng)Expressionofβ-hemolysinGeneofStaphylococcusaureusStrainsShandong(zfb)andItsHemolyticActivity1,2,311111YANGQin,WANGChang-fa,YANGHong-jun,YANGShao-hua,GAOYun-dong,ZHONGJi-feng,2PENGGuang-neng12(ResearchCenterofDairyCattle,ShandongAcademyofAgriculturalScience,Jinan
5、250100;CollegeofAnimalMedicalScience,3SichuanAgriculturalUniversity,Yaan625014,Sichuan;ChanglePrologueBureau,Weifang262404,Shandong)Abstract:【Objective】Thegenecodingthebeta-hemolysinwasclonedfromStaphylococcusaureusShandongstrainZfb,expressedinEscherichiacoli,andt
6、hehemolyticactivityoftherecombinantproteinwasanalyzed.【Method】hlbgenewasclonedfromgenomicDNAofStaphylococcusaureusbyPCR,andthePCRproductwasinsertedintovectorpET32a+toconstructplasmidpET32a+/hlb,theplasmidwasthenexpressedinEscherichiacoliBL21(DE3)cellsthatinducedby
7、IPTG..Thehemolyticactivitywasevaluatedby96wellmicrotiterV-platesusingpurifiedtherecombinationproteinagainstsheepandbovineerythrocytesandCAMPreactionwithStreptococcusagalactiae.【Result】SequenceanalysisshowedthattheStaphylococcusaureusβ-hemolysingene(hlb)wascomposed
8、of993nucleotidesencodingamaturepolypeptide330aminoacids;SDS-PAGEresultsshowedthattherecombinantproteinswereexpressedininclusionbodiesinEscherichiacoliwi
