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1、2014年第2月第2期一人黑素瘤中TrkB的表達(dá)及其意義高同君居(柳州市工人醫(yī)院皮膚性病科廣西柳州545000)【摘荽】目的：研究TrkB在人黑素瘤中的表達(dá)情況。方法：用免疫組化SP法檢測(cè)40例人黑素瘤和30例人色素痣組織中TrkB的表達(dá)。結(jié)果：黑素瘤組織和人色素痣組織中TrkB陽(yáng)性率分別為77．5％和16．7％，兩者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．01)。結(jié)論：TrkB在入黑素瘤組織中呈陽(yáng)性表達(dá)，其高表達(dá)可能是黑素瘤發(fā)生發(fā)展的原因之一?！娟P(guān)鍵{司】TrkB；人黑色素瘤組織；抗腫瘤機(jī)制【中圖分類~1R739．5【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼
2、】A【文章編號(hào)l2095—6851(20l4)2—0439一O1惡性黑素瘤(MalignantMelanoma)是一種高度惡性的腫瘤，多發(fā)生于胞發(fā)生轉(zhuǎn)移也是臨床上導(dǎo)致患者治療失敗和引起最終死亡的重要原因。皮膚，具有較強(qiáng)的轉(zhuǎn)移侵襲能力。而一旦發(fā)生轉(zhuǎn)移，其治療效果及預(yù)后均目前許多學(xué)者針對(duì)腫瘤的轉(zhuǎn)移特性做了大量研究，發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞能轉(zhuǎn)移不理想。目前對(duì)于惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的機(jī)制尚不明確，但越來越多的研究表至與其原發(fā)瘤所在的組織結(jié)構(gòu)完全不同的別的組織器官里生存并增殖，明惡性腫瘤轉(zhuǎn)移與腫瘤細(xì)胞具有抗失巢凋亡能力有關(guān)。失巢凋亡很大程度上與這
3、些腫瘤細(xì)胞具有抗失巢凋亡能力有關(guān)。某些具有抗失巢(Anoikis)是一種由于缺乏合適的細(xì)胞間或細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間粘附信息凋亡能力的瘤細(xì)胞脫落后不能馬上引起細(xì)胞凋亡，而是經(jīng)過旁自分泌和而介導(dǎo)的凋亡L1j。失巢凋亡抑制是惡性腫瘤細(xì)胞在轉(zhuǎn)移時(shí)生存于循環(huán)系旁分泌來抵抗凋亡，然后通過血流，淋巴等繼續(xù)擴(kuò)散到其他組織器官，并統(tǒng)的先決條件，是轉(zhuǎn)移的起始階段2J。酪氨酸激酶受體B(Tyrosinekinase增殖分化繼續(xù)生長(zhǎng)，即發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，這種抗失巢凋亡的能力是癌細(xì)胞發(fā)receptorB，TrkB)是細(xì)胞增殖、分化、凋亡和轉(zhuǎn)移途徑中信
4、號(hào)傳導(dǎo)的調(diào)控因生轉(zhuǎn)移并且生存的首要條件和關(guān)鍵因素j。子，是抑制失巢凋亡和誘導(dǎo)轉(zhuǎn)移的蛋白3“]。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化sP法隨著實(shí)驗(yàn)研究的不斷深人，在胃癌，腸癌，肺癌，卵巢癌等惡性腫瘤的檢測(cè)4o例人黑索瘤和3O例人色素痣組織中TrkB的表達(dá)，探討其在黑色細(xì)胞體外培養(yǎng)研究中均發(fā)現(xiàn)_6jTrkB高表達(dá)，并具有較強(qiáng)的抗失巢凋亡能素瘤轉(zhuǎn)移中的作用。力。TrkB／BDNF信號(hào)通路的激活與神經(jīng)母細(xì)胞瘤的轉(zhuǎn)移擴(kuò)散、化療藥抵材料與方法抗及預(yù)后差有關(guān)，并影響神經(jīng)系統(tǒng)的生長(zhǎng)發(fā)育、神經(jīng)元群的成形以及神經(jīng)一材料和方法系統(tǒng)功能的維持。在“失巢凋亡”的
5、凋控過程中，許多蛋白激酶信號(hào)分子1．1組織標(biāo)本：收集2010年至2013年柳州市工人醫(yī)院以及其它醫(yī)院都是以細(xì)胞基質(zhì)的黏附作用為媒介．最終成為失巢凋亡的重要調(diào)節(jié)因子。未行放化療黑色素瘤病人行腫瘤切除術(shù)后組織標(biāo)本40例(A組)，收集柳研究者對(duì)激酶信號(hào)介導(dǎo)失巢凋亡的研究大部分集中在PI3K／Akt和Raf／州市工人醫(yī)院2012年至2013年間色素痣經(jīng)切除后的組織標(biāo)本30例(BMEK／ERK激酶信號(hào)途徑l，特別是PDK／AKT信號(hào)途徑的激活能增強(qiáng)癌組)。癥細(xì)胞的生存和抵抗細(xì)胞凋亡的能力。TrkB基因也是一種癌基因，主要1．2主
6、要試劑：TrkB鼠抗人單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)R&D公司；生物素標(biāo)通過激活PI3K／Akt信號(hào)通路誘導(dǎo)癌細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖，并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的記山羊抗小鼠IgG、免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒均購(gòu)自武漢博士德轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)。生物工程有限公司；二甲苯、乙醇、氯化鈉等為國(guó)產(chǎn)分析純；蘇木素購(gòu)自上在本實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)在人黑素瘤組織切片中，TrkB的陽(yáng)性表達(dá)率為海信然生物科技有限公司；中性樹膠封片劑購(gòu)自上海瑞齊生物科技有限77．5％。與其在色素痣中陽(yáng)性表達(dá)率(16．7％)有明顯差異，其差異有統(tǒng)計(jì)公司。采用SP免疫組化法，按試劑盒說明書進(jìn)行操作
7、。以PBS緩沖液代學(xué)意義。這與研究者在鼻咽癌(陽(yáng)性率82．5％)_8J膽管癌(陽(yáng)性率替一抗作為陰性對(duì)照。69％)]以及卵巢上皮癌(陽(yáng)性率為67．12％)¨uJ中的研究結(jié)果一致。由1．3實(shí)驗(yàn)方法：全部標(biāo)本經(jīng)石蠟包埋，以4txm厚度連續(xù)切片，按照試于TrkB被證實(shí)為失巢凋亡抑制因子，在本實(shí)驗(yàn)中證實(shí)黑素瘤中存在TrkB劑盒說明將切片脫蠟、水化后采用sP免疫組化法，按試劑盒說明書進(jìn)行的高表達(dá)，因此我們推測(cè)黑素瘤可能具有抗失巢凋亡能力并通過這種能操作。取已知切片作為陽(yáng)性對(duì)照，PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。力引起其轉(zhuǎn)移。1．4
8、結(jié)果判定：TrkB主要表達(dá)于細(xì)胞膜和細(xì)胞漿內(nèi)，陽(yáng)性物質(zhì)為棕黃雖然TrkB作為一種抗失巢凋亡因子，被認(rèn)為可能通過PI3K／Akt和色。在高倍鏡下任選擇5個(gè)視野，參照Salvesen等的標(biāo)準(zhǔn)，綜合染色強(qiáng)度Raf／MEK／ERK的信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)引起腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，但其是否同時(shí)存在以及陽(yáng)性細(xì)胞所占比例進(jìn)行半定量分析。染色強(qiáng)度的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下：
