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《感染新型鴨呼腸孤病毒的番鴨肝臟蛋白質(zhì)組雙向電泳方法的建立-論文.pdf》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、中國虐學(xué)c亟強(qiáng)2013，29(26)：19—24ChineseAgriculturalScienceBulletin感染新型鴨呼腸孤病毒的番鴨肝臟蛋白質(zhì)組雙向電泳方法的建立黃梅清，朱果真，陳仕龍，鄭敏，程曉霞，陳少鶯(福建省畜禽疫病防治工程技術(shù)研究中心，福州350013；福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，福州350013；福建農(nóng)林大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，福州350007)摘要：為建立感染新型鴨呼腸孤病毒(NDRV)~番鴨肝臟蛋白質(zhì)組雙向電泳(2一DE)方法。本研究通過對人工感染NDRV的雛番鴨肝臟病變的觀察，對肝臟蛋白質(zhì)提取裂解液的配方、樣品上樣量、一向等電聚
2、焦(IEF)參數(shù)等條件的對比和優(yōu)化，建立了有效的番鴨肝臟2-DE方法。結(jié)果表明：采用攻毒后病變最典型的第5天的番鴨肝臟作為研究樣品；采用研磨．超聲一裂解液(7mol／L尿素、2mol／L硫脲、4％CHAPS、65mmol／LDTT、40mmo1／LTris—base、0．5％IPGbuffer)法提取肝臟蛋白質(zhì)，結(jié)合2Dclean—upkit以及去拖尾DeStreak試劑純化蛋白，按1100ug上樣，設(shè)置IEF參數(shù)為：50V12h、200V1．5h、500V1h、1000V1h、8000V3h、8000V60000Vh、500V維持，采用膠體考馬斯亮藍(lán)
3、染色，能獲得分辨率高、重復(fù)性好的2-DE圖譜。應(yīng)用建立的2-DE方法和PDQest8．0分析軟件，發(fā)現(xiàn)26個與正常番鴨肝臟蛋白表達(dá)水平超過3倍的差異蛋白點(diǎn)。該方法的建立為進(jìn)一步尋找NDRV感染宿主組織相關(guān)蛋白以及水禽呼腸孤病毒差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究提供了技術(shù)支持。關(guān)鍵詞：番鴨；肝臟；蛋白質(zhì)組；新型鴨呼腸孤病毒中圖分類號：$852．65文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A論文編號：2013．1350EstablishmentofTwo-dimensionalElectrophoresisforProtemeofLiverfromMuscovyDuckExperimentallyI
4、nfectedwithNorvelDuckReovirusHuangMeiqing‘，ZhuGuozhen，ChenShilong一，ZhengMin，ChengXiaoxia一，ChenShaoying，(FujianAnimalDiseasesControlTechnologyDevelopmentCenter，F(xiàn)uzhou350013；2[ustituteofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicine，F(xiàn)ujianAcademyofAgriculturalSciences，F(xiàn)uzhou350013；Collegeof
5、AnimalScience，F(xiàn)ujianAgriculturalandForestryUniversity，F(xiàn)uzhou350002)Abstract：TheaimwastoestablishanefficientTwo—DimensionalElectrophoresis(2一DE)ptotocolforproteomicmethodofliversfrommuscovyduckswhichwereexperimentallyinfectedwithNorvelDuckReovirus(NDRV)．Theconditionswhichincluded
6、thereagentofLysisbuffer，amountofloadedproteinandparametersofIsoelectricFocusing(IEF)werecomparedandoptimized．Thepathologicalchangesinliversweresimultaneouslyobserved．Theresultsshowedthattheliverswithcharacteristicpathologywerechosentobethesamples．whichwerefrommuscovyducksatthefi
7、fthdayafterinoculatedwithNDRV．Thehigh—resolutionandgood—repeatability2-DEimageswereobtainedwith1100gofliverproteinsampleswhichwereextractedbyLysis—buffer，purifiedby2Dclean-upkit，separatedby2一DEundersuitableelectrophoresisparameters，andstainedwithcolloidalCoomassiebrilliantblueG一
8、250solution．AnalyzedwiththesoftwarePDQest8．0，26
