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《教學講稿電泳技術(shù)課件》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、電泳技術(shù)1電泳：帶電粒子在電場中向著與其本身電荷相反的電極移動的過程。2電泳技術(shù)優(yōu)點：快速、準確、重現(xiàn)性好3電泳方法分類按電場分：常壓（<500V，適用大分子）、高壓（>500V，適用小分子）支持體分：自由電泳、區(qū)帶電泳儀器裝置分：水平式、垂直式、懸架式4電泳條件：水溶液（緩沖液）、支持物（區(qū)帶電泳）、電場（電泳儀、電泳槽）一電泳的基本原理電泳分離：移動方向：帶電性質(zhì)決定泳動度：帶電顆粒在單位電場強度下的移動速度。μ＝v/E=(d/t)/(V/l)=(dl)/Vt影響μ的因素：1顆粒本身：帶電、大小、形狀2外界因素
2、：電場強度E、pH、離子強度I、電滲、緩沖液粘度及溫度等。二電泳的分類分為自由電泳（無支持體）和區(qū)帶電泳（有支持體）兩大類。自由電泳包括Tise-leas式微量電泳、顯微電泳、等電聚焦電泳、等速電泳及密度梯度電泳。區(qū)帶電泳包括濾紙電泳（常壓及高壓）、薄層電泳（薄膜及薄板）、凝膠電泳（瓊脂、瓊脂糖、淀粉膠、聚丙烯酰胺凝膠）等。三紙電泳以濾紙為支持體的電泳技術(shù)操作要點：1選擇緩沖液對顯色劑和紫外光吸收等觀察區(qū)帶的方法無影響2濾紙的選擇與處理層析用濾紙，紙寬2～3cm/樣品組分，長短影響電場強度。3點樣點圓點（量少）、點
3、條狀（一般），點中間（未知樣品）、點一邊（已知樣品）干法、濕法4電泳電橋水平、加蓋、電壓穩(wěn)定、注意時間5顯色及分析蛋白：溴酚蘭、氨黑10B、偶氮胭脂紅BAa：茚三酮、靛紅核酸：紫外光下觀察一般洗脫定量四薄膜電泳支持體：薄膜優(yōu)點：分辨力較高、簡便、快速、區(qū)帶清晰、易于定量、便于保存廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)和同工酶等的分離分析操作1薄膜的處理與放置2點樣平衡3電泳：E10~25V/cm，0.5～2h4顯色五薄層電泳將支持物與緩沖液調(diào)制成適當厚度的薄層進行電泳。常用支持物：淀粉、瓊脂、纖維素粉、硅膠等操作：1緩沖液選擇離子強度較
4、高的緩沖液2支持物處理精制品3薄層板制作4加樣：挖溝、混合樣品、填埋5電泳6分析：印染法六凝膠電泳支持物：多孔凝膠聚丙烯酰胺凝膠、瓊脂糖凝膠等具有電泳和分子篩的雙重作用，分辨力高最常用聚丙烯酰胺凝膠，原因：機械強度好，透明有彈性，穩(wěn)定，無吸附作用和電滲作用，可制成不同孔徑的凝膠。分類：垂直管型盤狀電泳、垂直板型電泳；連續(xù)、不連續(xù)、梯度、SDS凝膠電泳凝膠電泳的操作要點1凝膠制備2電極緩沖液3樣品處理及加樣4電泳5染色與固定6脫色7分析煙曲霉菌中抗真菌活性肽類物質(zhì)的分離與純化七等電點聚焦電泳電泳系統(tǒng)中加進兩性電解質(zhì)載
5、體，當通已直流電時，兩性電解質(zhì)載體即形成一個由陽極到陰極連續(xù)增高的pH梯度。P進入時，不同的P移動到與其等電點相當?shù)膒H位置上，從而使不同等電點的P得以分離。優(yōu)點：分辨率高，區(qū)帶清晰、窄，加樣部位自由，重現(xiàn)性好，可測定P或多肽的等電點。缺點：需無鹽溶液，不適用于在等電點不溶解或發(fā)生變性的P。1穩(wěn)定的pH梯度的形成2兩性電解質(zhì)載體要求：由多乙烯多胺與丙烯酸加成制備（有不同pH范圍的商品兩性電解質(zhì)載體）3支持pH梯度的介質(zhì)密度梯度溶液（用于自由電泳）凝膠（如聚丙烯酰胺凝膠）4操作要點pH梯度支持介質(zhì)的制備聚焦電泳檢測兩
6、性電解質(zhì)載體的除去電泳技術(shù)思考題1名詞解釋電泳、電泳分離技術(shù)、泳動度、電滲、區(qū)帶電泳、相對遷移率2影響泳動度的主要因素有哪些？3區(qū)帶電泳的操作步驟一般有哪些？Bye-Bye
