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《與ezrin基因表達(dá)相關(guān)的微小RNA的篩選及在肝細(xì)胞癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中的作用-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、第23卷第36期China中Jo國(guó)ur現(xiàn)na代lo醫(yī)fM學(xué)od雜er志nMedicineV01．23No-362013年12月Dec．2013文章編號(hào)：1005—8982(2013)36-0005-06·論著·與ezrin基因表達(dá)相關(guān)的微小RNA的篩選及在肝細(xì)胞癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中的作用劉碧英，李堅(jiān)(中南大學(xué)衛(wèi)生部肝膽腸外科研究中心，湖南長(zhǎng)沙410008)摘要：目的篩選肝癌細(xì)胞中與ezrin基因表達(dá)相關(guān)的微小RNA(miRNA)，并分析其在肝癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中的作用。方法①實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄(RT)PCR技術(shù)和蛋白印跡法分別檢測(cè)兩對(duì)具有不同侵襲轉(zhuǎn)移
2、能力的肝癌細(xì)胞系HepG2和HepG2一x細(xì)胞及SF7721和SMMC一7721細(xì)胞中ezrinmRNA和蛋白的表達(dá)差異，選取其中eznnmRNA和蛋白表達(dá)差異相對(duì)較大的1對(duì)細(xì)胞系(即SF7721和SMMC一7721細(xì)胞)用于以下實(shí)驗(yàn)。②用miRNA芯片篩選SF7721和SMMC一7721細(xì)胞中差異表達(dá)miRNA，然后用生物信息學(xué)工具f三大數(shù)據(jù)庫(kù)，即TARGETscAN(http：／／www．targetscan．org)、MICROCOSM(http：／／www．ebi．a(chǎn)c．Uk／enright—srv／mi—crocos
3、m／htdocs／targets／vS／)和PICTAR(http：／／Ⅵ，ww．pictar．mdc—bedin．de)數(shù)據(jù)庫(kù)1預(yù)測(cè)并比對(duì)miRNA芯片的篩選結(jié)果，篩選出與ezfin基因表達(dá)相關(guān)的miRNA，并采用實(shí)時(shí)RT—PCR技術(shù)驗(yàn)證。將篩選出來(lái)的miRNA轉(zhuǎn)染SF7721細(xì)胞，用蛋白印跡法和實(shí)時(shí)RT—PCR技術(shù)檢測(cè)其對(duì)SF7721細(xì)胞中ezrinmBNA和蛋白表達(dá)的調(diào)控作用，以未做任何處理者為空白對(duì)照。結(jié)果①SF7721細(xì)胞中ezrinmRNA的表達(dá)水平是SMMC-7721細(xì)胞的(62．53±4．37)倍，HepG2-
4、X細(xì)胞中ezrinmRNA的表達(dá)水平是HepG2細(xì)胞的(2．61±0．23)倍，兩者分別比較，差異均有顯著性(P<0．01)；蛋白印跡法檢測(cè)顯示，SF7721細(xì)胞中ezrin蛋白的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于SMMC一7721細(xì)胞，HepG2一X細(xì)胞中ezrin蛋白的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于HepG2細(xì)胞。選取其中ezrinmRNA和蛋白表達(dá)差異相對(duì)較大的l對(duì)細(xì)胞系，即SF7721和SMMC一7721細(xì)胞用于以下實(shí)驗(yàn)。②將miRNA芯片篩選結(jié)果與生物信息學(xué)工具預(yù)測(cè)結(jié)果對(duì)比分析，篩選出兩個(gè)可能調(diào)控ezrin基因表達(dá)的特異rniRNA，即miR一18
5、3和n1iR-22；實(shí)時(shí)RT—PcR技術(shù)檢測(cè)顯示，miR一183和miR-22在SF7721和SMMC-7721細(xì)胞中的表達(dá)差異，與miRNA芯片篩選結(jié)果一致，SMMC一7721細(xì)胞中miR一183和miR一22的表達(dá)水平分別是SF7721細(xì)胞的(7．21±1．16)和(8．52±1．43)倍．兩者分別比較，差異均有顯著性(P<0．01)。miRNA轉(zhuǎn)染SF7721細(xì)胞后，其ezrinmRNA的表達(dá)水平是空白對(duì)照的(1．27±0．26)倍，兩者比較，差異無(wú)顯著性(P>0．O5)；而ezrin蛋白的表達(dá)強(qiáng)度則明顯低于空白對(duì)照。結(jié)
6、論侵襲力強(qiáng)的肝癌細(xì)胞中ezrinmRNA和蛋白均高表達(dá)，與ezrin基因表達(dá)相關(guān)的miRNA—miR一183和miR一22的過(guò)度表達(dá)均能有效調(diào)節(jié)侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因ezfin蛋白的表達(dá)水平，它們可能具有ezrin基因介導(dǎo)的抑制肝癌細(xì)胞浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的潛在功能。關(guān)鍵詞：肝癌；微RNAs；細(xì)胞支架蛋白質(zhì)類；腫瘤轉(zhuǎn)移中圖分類號(hào)：R735．7文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：APotentialroleofezrinanditsrelatedmicroRNAinLivercancerinvasionandmetastasisLIUBi-ying，LIJian(Nat
7、ionalHepatobiliary&EntericSurgeryResearchCenter,Changsha,Hunan410008,P．R．China)Abstract：【Objective】ToscreenmicroRNA(miRNA)thatinhibitexpressionofthemetastasisrelatedgeneezrininlivercancercellsandexploretheircorrelationtotheinvasionandmetastasisofolivercancer．【Method
8、s】The收稿日期：2013—01—21【作者簡(jiǎn)介]劉碧英，現(xiàn)工作單位為湖南長(zhǎng)沙衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)學(xué)科部[通信作者】李堅(jiān)，E-mail：lijian869@126．corn，Tel：13787182978·5·中同現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志第23卷diferentialexpressio
