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《水稻Osε-cop1基因的原核表達(dá)及多克隆抗體制備.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，2013年，第32卷，第4期，第497—502頁GenomicsandAppliedBiology，2013，Vo1．32，No．4，497—502研究報(bào)告ResearchReport水稻Ose—copl基因的原核表達(dá)及多克隆抗體制備楊加偉I周玲艷2莊楚雄。1遵義醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)教研室，遵義，563003；2仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，廣州，510225；3華南農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廣州，510642通訊作者、zhuangcx@scau．edu．cn摘要￡一COP蛋白是真核生物分泌途徑中COPI有被小泡的一個(gè)亞基。本研究利用PCR技術(shù)擴(kuò)增水稻一cop
2、基N(os一cop1)~ORF(開放閱讀框)，并克隆到原核表達(dá)載體pET一23d上，將表達(dá)載體pET—Ose—cop1轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)，以1．0mmol／L的IPTG(isopropyl3-D—thiogalactoside)誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白，然后以重組蛋白作為抗原免疫家兔，制備多克隆抗體。SDS．PAGE電泳分析結(jié)果表明，成功誘導(dǎo)表達(dá)了分子量約為35kD的重組蛋白，Westernblot檢測(cè)表明，免疫家兔的抗血清與水稻幼穗總蛋白雜交信號(hào)較好。Oss—C0P1抗體的制備有助于研究該基因及COPI小泡在水稻中的功能。關(guān)鍵詞Ose—copl水稻，原核表達(dá)，抗體P
3、rokaryoticExpressionandPolyclonalAntibodyPreparationofOse——coplinRice(OryzasativaL．)YangJiaweiZhouLingyanZhuangChuxiong1DepartmentofBiochemistry，ZunyiMedicalCollege，Zunyi，563003；2CollegeofLifeSciences，ZhongkaiUniversityofAgricultureandEngineer—ing，Guangzhou，510225；3CollegeofLifeSciences，S
4、outhChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou，510642Correspondingauthor，zhuangcx@scau．edu．cnDOI：10．3969／gab．032．000497AbstractThe8一COPiSoneofthesubunitsofCOPIvesicleinsecretpathwayofeukaryoticcells．TheORF(openreadingframe)ofe—copgeneinrice(Ose—cop1)wasobtainedbyPCRandclonedintotheprokaryotice
5、xpres-sionvectorpET一23d．TheresultingplasmidwasthenintroducedintoE．colstrainBL21(DE3)andinducedtoex．presstherecombinantOse—COPIproteinby1．0mmol／LisopropylB—D—thiogalactoside(IPTG)．Afterwards，there—combinantOSE—COP1proteinwasusedasantigentoimmunerabbits．Theresultsdemonstrateda35kDproteinwas
6、expressedsuccessfullyinducingbyIPTG．Westernblotanalysisshowedthattheantiserumimmunologicalrecog—nizedriceOse—COP1proteinwithhighspecificity,indicatingthatthepolyclonalantibodywaspreparedsuccessful—ly．ThisworkwouldcontributetostudythefunctionofOse—coplgeneandCOPIvesicleinrice．KeywordsOse—c
7、opl，Rice(OryzasativaL．)，Prokaryoticexpression，Antibody膜泡運(yùn)輸是介導(dǎo)真核細(xì)胞蛋白質(zhì)分泌途徑的主白：0／．一COP、[3-cop、3'-COP、一COP、8-COP、8一COP要方式(Gerdes，2008)。到目前為止，已經(jīng)成功鑒定出和(一COP(Waterseta1．，1991)。七個(gè)COP蛋白按等分三種運(yùn)輸小泡：網(wǎng)格蛋白有被小泡，COPI有被小泡子比例在胞漿中以復(fù)合體的形式存在，稱為外被體和COP1I有被小泡(Kirchhausen，2000)。其中，COPI(coat
