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1、中國(guó)獸醫(yī)雜志2015年(第51卷)第3期67基因敲除技術(shù)的研究進(jìn)展周維，付喜愛(ài)，張德顯，田春蓮，漢麗梅，劉明春(沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院，遼寧沈陽(yáng)110866)中圖分類號(hào)：Q78文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：0529—6005(2015)03—0067—02基因敲除(geneknockout)技術(shù)是于2O世紀(jì)8O年苷酸的包含5’磷酸、3’羧基末端以及2個(gè)游離核代建立并發(fā)展起來(lái)的分子生物學(xué)技術(shù)。該技術(shù)是苷酸的一系列片段的總稱，具有強(qiáng)大的抑制基因以DNA同源重組技術(shù)和胚胎干細(xì)胞技術(shù)為基礎(chǔ)，經(jīng)功能的作用。siRNA能夠與RNAi特異性酶結(jié)合過(guò)3O余年的發(fā)展，現(xiàn)今已
2、經(jīng)有多種基因敲除技術(shù)被形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物(RNA—inducedsilenc—應(yīng)用于分子生物學(xué)、遺傳學(xué)等諸多領(lǐng)域。ingcomplex，RISC)。RISC具有核酸內(nèi)、外切酶和生物體基因功能的研究已經(jīng)成為當(dāng)下最熱門解旋酶活性，能夠精確介導(dǎo)與siRNA同源的的課題。現(xiàn)階段基因功能的研究主要是通過(guò)減mRNA降解。siRNA介導(dǎo)RISC與同源性的mRNA弱或中止某一基因表達(dá)，觀察生物體整體功能變結(jié)合，在解旋酶的作用下解開siRNA的雙鏈，RISC化，推測(cè)該基因的相關(guān)功能，然后將基因與生物前體被激活，正義RNA單鏈被釋放而反義RNA單整體功能相關(guān)聯(lián)進(jìn)行深
3、入探究，為最終確定基因鏈介導(dǎo)活化復(fù)合物，識(shí)別并結(jié)合到靶mRNA上，將功能提供依據(jù)。隨著功能基因組學(xué)研究的深人，mRNA切割，通過(guò)核酸外切酶徹底降解切割片段，相關(guān)技術(shù)也得到不斷地發(fā)展與完善，其中最為常造成轉(zhuǎn)錄信息缺失，從而封閉內(nèi)源性基因的表達(dá)用的便是基因敲除技術(shù)。使該基因失活，以實(shí)現(xiàn)特定基因的敲除-z-。對(duì)不易獲得突變體的生物而言，RNAi技術(shù)是1RNA干擾技術(shù)一種簡(jiǎn)便的研究基因功能的手段。Zhen等利用RNA干擾(RNAInterference，RNAi)是指內(nèi)源性RNAi技術(shù)抑制豬顆粒細(xì)胞中CEBP[3基因表達(dá)，揭或外源性雙鏈RNA(double—s
4、trandedRNA，dsRNA)示該基因?qū)ωi顆粒細(xì)胞的細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡以進(jìn)入細(xì)胞后，在細(xì)胞內(nèi)特異性降解與其同源的mRNA，及類固醇合成等方面的影響]。RNAi技術(shù)可以針從而抑制相應(yīng)基因的表達(dá)，使細(xì)胞表現(xiàn)出特定基因?qū)δ骋惶囟ɑ蛟谔囟òl(fā)育階段的功能進(jìn)行研缺失的表型，該現(xiàn)象也被稱為基因沉默u。究。郎國(guó)竣等采用RNAi技術(shù)，抑制家蠶不同發(fā)RNAi由小干擾RNA(smallintereferenceRNA育時(shí)期乙酰膽堿酯酶基因(AchE)表達(dá)，對(duì)家蠶的siRNA)引起，siRNA是由RNAaselII樣Dicer酶作生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生明顯影響。用于dsRNA，使
5、dsRNA被切割成長(zhǎng)度為21～23核2Red同源重組技術(shù)收稿日期：2014—03—17Zhang等先后研究發(fā)現(xiàn)，大腸桿菌中存在的RecE、基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金(31272601；31201954)RecT蛋白以及大腸桿菌入噬菌體的Exo和Beta蛋白作者簡(jiǎn)介：周維(1989一)，男，碩士生，從事獸醫(yī)藥理與毒理學(xué)研究，E—mail：warn1314head@163．COB都具有同源重組的能力，能夠?qū)Υ竽c桿菌基因組進(jìn)通訊作者：劉明春，E-mail：liumingchun@sina．com行精確的基因修飾。由于上述兩個(gè)系統(tǒng)具有相似(6)：886—889
6、．a(chǎn)ndabaeteriophage[J】．BMCMicrobiol，2013．[18】LungrenMP，ChristensenD，KankotiaR，eta1．BacteriophageK【21】OliveiraA，SerenoR，AzeredoJ．InvivoeficiencyevaluationofaforreductionofStaphylococcusaureusbiofilmoncentralvenousphagecocktailincontrollingseverecolibacillosisinconfinedcon—catheter
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