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《禽流感病毒NS2蛋白的原核表達及多克隆抗體的制備.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第34卷第6期中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報VOl_34．No．62012年6月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJun．20l2doi：10．3969~．issn．1008-0589．2012．06．17禽流感病毒NS2蛋白的原核表達及多克隆抗體的制備陳佳寧，郭晶，李旭勇，陳化蘭’(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點實驗室，黑龍江哈爾濱150001)摘要：為制備禽流感病毒(ArC)NS2蛋白的多克隆抗體，本研究將人工合成的NS2基因克隆至表達栽體pET一28a中，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(
2、DE3)，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達His．NS2重組蛋白。SDS．PAGE和westernblot試驗表明，該重組蛋白獲得大量表達，可溶性高，并且具有較好的反應(yīng)原性。將純化后的重組蛋白免疫新西蘭白兔制備多克隆抗體，并通過間接ELISA檢測其效價達1：20000以上。Westernblot和間接免疫熒光試驗顯示，多克隆抗體能夠與NS2蛋白特異性結(jié)合。關(guān)鍵詞：禽流感病毒；NS2蛋白；原核表達；多克隆抗體中圖分類號：$852．61文獻標(biāo)識碼：A文章編號：1008．0589(2012)06．048903Prokaryoticexpressionofavia
3、ninfluenzavirusNS2proteinand。preparationofpolyclonalantibodyCHENJia—ning，GUOJing，LIXu—yong，CHENHua—lan’(StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinaryResearchInstituteChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China)Abstract：Topreparedpolyelonalantibody
4、againstNS2proteinofavianinfluenzavirus(AIV)，theNS2genewassynthesizedandclonedintopET-28atoconstructtheprokaryoticexpressionplasmidpET-NS2．ThesolublerecombinantproteinwasexpressedinE．coliBL21(DE3)withIPTGinductionandidentifiedbytheSDS—PAGEandwesternblot．Thepolyclonalantibody
5、waspreparedfromtherabbitimmunizedwithpurifiedrecombinantprotein．Thetiteroftheantibodywasabout1：20000bydetectionofindirectELISA．ThewesternblotandindirectimmunofluorescenceassayalsoconfirmedthatthepolyclonalantibodyreactedspeciallywithAIVNS2protein，whichwouldbeusedforstudyoft
6、heNS2function．Keywords：avianinfluenzavirus；NS2protein；prokaryoticexpression；polyclonalantibody禽流感是由A型流感病毒引起的一種禽類烈性目前，對于AIV的遺傳演化[J]、分子致病機制[2-3]、傳染病，嚴(yán)重影響?zhàn)B禽業(yè)的發(fā)展。自2003年以來已分子水平傳播機制[4等方面的研究已取得了一定進有60多個國家和地區(qū)爆發(fā)禽流感。近年來，由于禽展，但關(guān)于病毒蛋白與宿主相互作用方面仍未得到流感病毒(Avianinfluenzavirus，AIV)的抗原漂移，充分闡述
7、。與其它RNA病毒不同，AIV在感染細胞該病毒已跨越種間屏障，威脅人類的健康。WHO的細胞核內(nèi)復(fù)制，新合成的vRNP只有從細胞核轉(zhuǎn)公布數(shù)據(jù)顯示，人感染禽流感病例已達到600例，運到細胞質(zhì)才能完成下一步的病毒組裝【”】。而AIV病死率近60％。的基質(zhì)蛋白M1和核輸出蛋白NS2在這一步起到關(guān)收稿日期：2012．02．07基金項目：國家973專項(2011CD505000)作者簡介：陳佳寧(1986．)，男，江蘇常州人，碩士研究生，主要從事動物流感病毒致病機制研究通信作者：E．mail：hlchenl@yahoo．eom
