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《牛傳染性鼻氣管炎病毒gE基因SYBR Green Ⅰ熒光定量PCR檢測方法的建立.pdf》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第33卷第3期內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)Vo1．33No．32012年5月May．2012JOUlTlaloflnnerMongoliaAgriculturalUniversity牛傳染性鼻氣管炎病毒gE基因SYBRGreenI熒光定量PCR檢測方法的建立孫志明，用偉光，陳玉惠，高晶，希尼尼根，關(guān)平原(1．內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，呼和浩特010018；2．農(nóng)業(yè)部動(dòng)物疾病臨床診療技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，呼和浩特010018)摘要：目的建立1種特異、靈敏、高效的檢測1BRVgE基因的熒光定量PCR方法，并為鑒別IBRV
2、野毒株和gE基因缺失疫苗株的感染提供技術(shù)手段。方法根據(jù)IBRVgE基因保守序列，設(shè)計(jì)一對引物，建立熒光定量PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件，利用10倍梯度稀釋病毒DNA進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增，以檢測本試驗(yàn)建立的熒光定量PCR的靈敏度。用IBRV、牛病毒性腹瀉病毒、牛輪狀病毒、MDBK細(xì)胞、牛血清等進(jìn)行特異性檢測。用模擬樣品進(jìn)行臨床應(yīng)用試驗(yàn)。結(jié)果本試驗(yàn)建立的熒光定量PCR方法，其靈敏度約為70DNA拷貝／L，除了IBRV從其他病毒和樣品未擴(kuò)增出曲線，臨床模擬樣品檢測結(jié)果為0．03TCID50。結(jié)論本試驗(yàn)建立的
3、熒光定量PCR方法具有特異性強(qiáng)、靈敏性高、快速，低污染等優(yōu)點(diǎn)，因此臨床上可以用于IBRV的檢測和病原學(xué)調(diào)查。關(guān)鍵詞：牛傳染性鼻氣管炎病毒；熒光定量PCR；靈敏性；特異性中圖分類號：$858．235文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1009—3575(2012)03—0005—04DEVELOPMENTOFSYBRGREENREAL—TIMEPCRFORQUANTlFYINGINFECTIOUSBOVINERHlNOTRACHEITlSVIRUSgEGENESUNZhi—rning，ZIIOUWci—guang
4、，cItENGYu—hui，GAOJing，Xininigen(CollegeofVeterinaryMedicine，InnerMongoliaAgriculturalUniversity，KeylaboratoryofClinicalDiagnosisandTreatmentTechnologyinAnimalDisease，MinistryofAgriculture，ttohhot，010018，China)Abstract：PurposeToestablishtheReal—timePCRf
5、ordetectionofIBRVgEgene，andtodistinguishbetweentheIBRVwildstrainandgEdeletionIBRVvaccinestrain．MethodsApairofprimerweredesignedbasedontheIBRVgEgeneconservativeregion．Thereal—timePCRmethodwasdevelopedbytheoptimizationofthereactionconditions．Theviral10一f
6、oldsefialdilutionDNAsamplesandIBRV．BVDV，bovinerotavirus，MDBkcellsandbovineselqlmwereusedtotestthesensitivityandspeeificityofthemethod．Re．suitThereal—timePCRmethodhadbeendeveloped．a(chǎn)nditcoulddetect70eopies／~L．Theresuhoftheclinicalsimulationdetectionwas0．
7、03TCID50．Conelusion：Thismethodcharacterizedbyhighspecific，sensitive，shorttestingtimeandlowerpollution．Incon．clusion，thismethodcouldbeusedforrapidquantitativedetectionofIBRVinclinicalsamples．Keywords：BovineRhinotracheitisvirus：Real—timePCR：sensitivity：s
8、pecificity牛傳染性鼻氣管炎病毒(InfectiousBovineRhi—炎和生殖道黏膜病變-1J。本病于1950年首次發(fā)現(xiàn)notracheitisVirus，IBRV)又被稱為牛皰疹病毒1型、于美國，目前廣泛流傳于世界各地。我國大部分地壞死性鼻炎病毒和傳染性膿包外陰陰道炎病毒。該區(qū)都有不同程度該病毒的感染。對牛的育肥、繁殖病毒屬于皰疹病毒科的甲皰疹病毒亞科，具有典型力、產(chǎn)奶量等都有較大影響，給我國養(yǎng)牛業(yè)造成很大的泛嗜性，能侵襲多種組織器官，引起多種臨床癥的經(jīng)
