超順磁性氧化鐵標(biāo)記骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療兔急性胰腺炎的磁共振活體示蹤-論文.pdf

《超順磁性氧化鐵標(biāo)記骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療兔急性胰腺炎的磁共振活體示蹤-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。

1、November2013,Vo1．13,No．1l·1419·中國(guó)藥物與臨床2013年11月第l3卷第11期ChineseRemedies&Clinics,——·基礎(chǔ)研究·超順磁性氧化鐵標(biāo)記骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療兔急性胰腺炎的磁共振活體示蹤張瑞平姜增譽(yù)李健丁重癥急性胰腺炎(severeacutepancreatitis，SAP)是由各間層MSCs，加入到含5ml培養(yǎng)基的無(wú)菌離心管中。常溫下種原因引起胰酶被激活，導(dǎo)致胰腺組織自身消化、水腫、出血以1000r／min離心洗滌l0min，棄去上清，取細(xì)胞沉淀。細(xì)胞和壞死的炎癥反應(yīng)，常繼發(fā)感染性腹膜炎、休克、

2、全身炎癥反沉淀中加入含20％胎牛血清的L．DMEM培養(yǎng)基，調(diào)整細(xì)胞密應(yīng)綜合征和多器官功能障礙綜合征等嚴(yán)重并發(fā)癥，預(yù)后極度約1~106／ml，接種于25cm細(xì)胞培養(yǎng)瓶，在37℃，體積分差[1]。目前的治療措施主要是對(duì)癥治療、支持治療、預(yù)防胰腺數(shù)為5％CO：，飽和濕度恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。48h后更換感染和壞死，療效仍不佳。近年來(lái)，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mes—培養(yǎng)基。去除未貼壁細(xì)胞，以后視細(xì)胞生長(zhǎng)情況每3—5d換enchymalstemcells．MSCs)移植治療急性胰腺炎的實(shí)驗(yàn)研究液1次。待貼壁細(xì)胞約90％時(shí)，用0．25％的胰蛋白酶消化，按認(rèn)為MSCs可

3、分化為有功能的胰腺干細(xì)胞，對(duì)損傷的胰腺進(jìn)1：2傳代后繼續(xù)培養(yǎng)，用倒置相差顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)。取第行修復(fù)。為治療重癥SAP提供了一種新的思路和手段，而細(xì)3代細(xì)胞．分別與一抗(抗CD29、CD34、CD44、CD45單克隆胞移植后在活體內(nèi)示蹤成為隨之而來(lái)的研究難點(diǎn)。近年來(lái)，抗體)室溫反應(yīng)30min，PBS液洗滌后重懸細(xì)胞，1％多聚甲醛隨著超順磁性氧化鐵(SPIO)納米顆粒標(biāo)記細(xì)胞技術(shù)的成熟，固定15min，然后進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)。磁共振成像(MRI)活體示蹤SPIO標(biāo)記細(xì)胞成為新的研究熱1．4MSCs的磁標(biāo)記：多聚左旋賴(lài)氨酸(PLL)與SHO混懸點(diǎn)【=I]

4、。本實(shí)驗(yàn)擬采用SPIO標(biāo)記兔MSCs并移植入SAP模型兔于培養(yǎng)液中(PLL和SPIO的終濃度分別為1．5I~g／ml和250行MRI掃描．探討干細(xì)胞移植治療SAP過(guò)程中，MRI活體示Ixg／m1)，將SPIO．PLL復(fù)合物分別以1：4與培養(yǎng)基混合，使鐵蹤移植干細(xì)胞的可行性。的終濃度為50Ixg／ml，加入到第3代MSCs培養(yǎng)液中進(jìn)行標(biāo)1材料和方法記，置于37℃、體積分?jǐn)?shù)為5％CO：培養(yǎng)箱中孵育過(guò)夜。以未1．1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：選12只體質(zhì)量600～700g的健康新西蘭大標(biāo)記細(xì)胞作為對(duì)照組。白兔，雌雄不拘，由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1．5建立模型：參照文獻(xiàn)

5、[4]建立SAP模型，將實(shí)驗(yàn)兔固定1．2主要試劑和設(shè)備：SPIO納米顆粒為德國(guó)Schering公司后常規(guī)消毒、鋪巾，在無(wú)菌條件下，模型兔沿腹門(mén)線(xiàn)正中切口生產(chǎn)的Resovist：1．4ml／支．含鐵濃度0．5mmol／ml，鐵顆粒直進(jìn)腹，暴露胰十二指腸及膽總管。找到十二指腸乳頭部，給予徑(5O±5)nm。德國(guó)Siemens公司的1．5TSonataMRI系統(tǒng)。美絲線(xiàn)縫扎(胰管結(jié)扎)，膽總管中段絲線(xiàn)結(jié)扎，結(jié)扎處上段置國(guó)Hyclone公司的達(dá)氏修正伊氏培養(yǎng)基(DMEM)，杭州四季人頭皮針尾部的塑料管，引流膽汁。乳頭縫扎處上段同樣置青生物工程材料有限公司的胎牛

6、血清，天津化學(xué)試劑三廠(chǎng)的人頭皮針尾部的塑料管作為胰膽管引流管。用2ml注射器從普魯士藍(lán)。膽總管引流管抽取膽汁，注入胰膽管引流管，動(dòng)脈夾夾閉此1．3MSCs的體外分離、培養(yǎng)、傳代和鑒定：用3％戊巴比妥鈉引流管5～10min，完成胰腺炎模型制作。30mg／kg經(jīng)兔耳緣靜脈麻醉，無(wú)菌操作下，分別在雙側(cè)髂骨1．6移植細(xì)胞和MRI：造SAP模型后隨機(jī)分為2組．每組6上部穿入骨髓穿刺針，共抽取骨髓3～4ml。將抽取的骨髓加只。SAP造模后第2天，經(jīng)兔耳緣靜脈各組分別注入細(xì)胞懸入到含5ml磷酸鹽緩沖液(PBS)的無(wú)菌離心管中，充分混液和PBS液。實(shí)驗(yàn)組：用微量注射器

7、將含有1xl06個(gè)SPIO標(biāo)勻。常溫下2000r／min離心15min，吸棄上清及脂肪層，再加記的MSCs的細(xì)胞懸液50l緩慢注入；對(duì)照組：注射入50入4mlPBS液，充分混勻。將上述懸液緩慢加到含4ml比重IxlPBS液。隨機(jī)抽取各組模型兔，在細(xì)胞移植后5、10、15d1．077g／LPereoll淋巴細(xì)胞分離液的無(wú)菌離心管中。常溫下以分別進(jìn)行MRI。2000r／rain離心15min，可見(jiàn)離心管內(nèi)液體分為3層。收集中1．7損傷組織普魯士藍(lán)染色：模型兔經(jīng)MRI后處死，取胰腺組織。將胰腺組織塊置入4％多聚甲醛溶液中浸泡、固定，然DOI：10．11655

8、／zgywylc2013．11．010后經(jīng)沖洗、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片，行普魯士藍(lán)染色。