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《間充質(zhì)干細(xì)胞旁分泌物質(zhì)誘導(dǎo)肝星狀細(xì)胞凋亡的體外研究.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)第34卷第8期·1040·ACTAUNIVERSITATISMEDICINALISNANJING(NaturalScience)2014年8月間充質(zhì)干細(xì)胞旁分泌物質(zhì)誘導(dǎo)肝星狀細(xì)胞凋亡的體外研究徐唬，施啟鵬，周晗，蔡潔，李軍，章莉莉(南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院感染病科，江蘇南京210029)[摘要]目的：研究間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymalstemcell，MSC)旁分泌物質(zhì)對(duì)活化的肝星狀細(xì)胞Lx一2的影響及作用機(jī)制。方法：應(yīng)用6孔塑料細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔使用半透膜，構(gòu)建Transwell共培養(yǎng)體系；將骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞(bonema~owme
2、senchymalstemcell，BM．MSC)和人肝星狀細(xì)胞系Lx一2分別接種在體系的上下層，并把此組作為實(shí)驗(yàn)組，單獨(dú)培養(yǎng)的Lx一2作為對(duì)照組，觀察培養(yǎng)液中MSC旁分泌物質(zhì)對(duì)Lx．2的影響。采用流式細(xì)胞術(shù)及Hoeehst33342染色法分別檢測(cè)Lx．2細(xì)胞凋亡的情況，qRT—PCR和Westernblot檢測(cè)k．2中解耦聯(lián)蛋白2(uncouplingprotein2，UCP2)的mRNA和蛋白水平的表達(dá)量，熒光探針法檢測(cè)Lx．2細(xì)胞內(nèi)及線粒體中活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)的熒光強(qiáng)度，采用硫代巴比妥酸(thiobarbituricacid，
3、TBA)法檢測(cè)細(xì)胞丙二醛(mal0ndialdehyde，MDA)的含量。結(jié)果：與對(duì)照組相比，Hoechst33342染色后可見部分Lx．2染色質(zhì)固縮、顆粒狀熒光等凋亡細(xì)胞典型表現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組Lx。2凋亡率是對(duì)照組的2．6倍(P<0．05)。實(shí)驗(yàn)組Lx．2中UCP2mRNA及蛋白表達(dá)量顯著低于對(duì)照組(P<0．05)；實(shí)驗(yàn)組Lx一2細(xì)胞內(nèi)和線粒體中ROS水平明顯升高。細(xì)胞培養(yǎng)上清中MDA為(0．43±0．47)mmo~L，顯著高于對(duì)照組(0．16±0．43)mmol／L(P<0．05)。結(jié)論：MSC旁分泌物質(zhì)有誘導(dǎo)Lx一2細(xì)胞凋亡的作用；可能與MSC旁分泌物質(zhì)抑制UCP2的表達(dá)，
4、促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)及線粒體ROS過(guò)量生成有關(guān)。[關(guān)鍵詞]間充質(zhì)干細(xì)胞；旁分泌；肝星狀細(xì)胞；凋亡；活性氧；解耦聯(lián)蛋白2[中圖分類號(hào)]Q255[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A[文章編號(hào)]lOO7-4368(2o14)08—1040—06doi：10．7655／NYDXBNS20140808Humanmesenchymalstemcellssecretedfactorsinducingapoptosisofhepaticstellatecells／nvitroXuLiang，ShiQipeng，ZhouHan，CaiJie，LiJun，ZhangLili(DepartmentofInfectiousDi
5、sease，theFirstAffiliatedHospitalofNJMU，Nanjing210029，China)[Abstract]0bjeetive：Toobservetheparacrineeffectsofmesenchymalstemcells(MSC)ontheactivatedhepaticstellatecellsLx一2，andexplorethepossiblemechanisms．Methods：Aco-culturesystemwasestablishedbyculturingbonemarrowmesenchymalstemcell(BM—MS
6、C)intheTranswellinsertandLx一2ontheplasticplates(6wel1)，whichwereplacedontheupperandlowerlayerrepectively，andsetitastheexperimentgroup．NormalLx一2wasculturedaloneascontro1．CellapoptosiswasdeterminedbyHoechst33342stainingandflowcytometry，respectively．Theexpressionsofuncouplingprotein2(UCP2)mR
7、NAandproteininLx-2weredetectedbyquantitativereal—timePCR(qRT—PCR)andWesternblot，respectively．Intracellularandmitochondrialreactiveoxygenspecies(ROS)levelsofLx一2weremeasuredbyfluorescentprobemethod．ThecontentofMDAinco—culturesupernatantwasdeterminedbythiobarbit
