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《柞蠶模式識別受體βGRP的基因克隆及序列特征和誘導(dǎo)表達(dá)譜分析.pdf》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、5CienceofSericulture2012，38(3)：0449—0455ISSN0257—4799；CN32—1115／SE—mail：CYKE@chinajourna1．net．on柞蠶模式識別受體13GRP的基因克隆及序列特征和誘導(dǎo)表達(dá)譜分析李鳳娟姜德富李喜升王鳳成李文利(大連理工大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，~T；klg116023；。遼寧省蠶業(yè)科學(xué)研究所，遼寧鳳城118100)摘要在昆蟲的免疫防御系統(tǒng)中，模式識別受體介導(dǎo)的免疫反應(yīng)起著主導(dǎo)性作用。采用RACE方"；Z-L隆了柞蠶的模式識別受體——p一1，3-葡聚糖識別蛋白的基因ApflGRP(G
2、enBank登錄號：JN880424)。序列分析表明：ApflGRP含有1470bp的開放閱讀框，編碼490個氨基酸；Ap[3GRP屬于分泌型蛋白質(zhì)，N端有17個氨基酸組成的信號肽，具有13GRP保守性的糖苷水解酶活性結(jié)構(gòu)域(Glyco—hydro一16)。系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示Apl3GRP與家蠶的pGRP一3屬于同一個分支，序列相似度為71％。利用實(shí)時定量PCR方法檢測柞蠶蛹經(jīng)4種微生物(革蘭陽性菌Bacillussubtilis、革蘭陰性菌EscherichiⅡc0liTop10、病毒Antherne0pernyinucleopolyhedrovirus
3、、真菌SaccharomycescerevisiaeW303—1A)誘導(dǎo)處理后，ApBGRP在蛹體表皮、脂肪體和血淋巴中均明顯上調(diào)表達(dá)，但在生殖腺內(nèi)的表達(dá)則無明顯變化，該基因在中腸內(nèi)僅被革蘭陽性菌及真菌誘導(dǎo)上調(diào)表達(dá)，并且該基因?qū)φ婢膽?yīng)答表達(dá)最顯著，顯示ApflGRP經(jīng)不同微生物誘導(dǎo)后的表達(dá)水平以及在蛹體不同組織中的表達(dá)水平有明顯差異。推測Ap[3GRP因具有糖苷水解酶活性結(jié)構(gòu)域能水解病原體的多糖，所以可以通過與微生物表面相關(guān)分子模式的結(jié)合而識別多種微生物，并調(diào)控相關(guān)的免疫通路，在柞蠶免疫系統(tǒng)中發(fā)揮作用。關(guān)鍵詞柞蠶；3-葡聚糖識別蛋白；序列特征；表達(dá)模式
4、；微生物誘導(dǎo)中圖分類號$885．1；Q78文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號0257—4799(2012)03—0449—07Cloning，SequenceFeatureandInducedExpressionProfileofPat-ternRecognitionReceptorI~GRPofAntheraeapernyiLIFeng—JuanJIANGDe—FuLIXi—ShengWANGFeng—ChengLIWen—Li’(SchoolofLifeScienceandB~technology，DalianUniversityofTechnology，Dal~
5、nL~oning116023，China；SericulturalResearchInstituteofL~oningPrownce，F(xiàn)engchengLiaoning118100，China)AbstractJmmunoreactionmediatedbypatternrecognitionreceptorsplaysapredominantroleinjnsect；mmunedefensesystem．Inthispaper，weclonedtheAntheraeaper幾patternrecognitionreceptorprotein(p一1，3
6、一glucanrecognitionprotein)geneAp~GRP(GenBankaccessionNo．JN880424)byRACEtechnology．SequenceanalysisindicatedthatApf3GRPhasanopenreadingframeof1470bpandcodesfor490aminoacids．API~GRPisasecretedproteinwithasignalpeptideconsistingof17aminoacidsattheN—terminusandcontainsaconservativepG
7、RPdomainwithglycosidichydrolaseactivity(Glyco—hydro一16)．PhylogeneticanalysisshowedthatAppGBPandBombyxmoripGBP-3belongedtothesameclade．a(chǎn)ndhadasequenceidentityof71％．Real—timequantitativePCRwasconductedtodetecttheexpressionpa~ernofAp#GRPfndifferentlissuesofsilkwormafterinfectionby4d
8、ifferentmicroorganisms．namelyGram—positi
