實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT.ppt

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1、琥珀酸脫氫酶的作用及其競爭性抑制生物化學(xué)與分子生物學(xué)系陳園園實驗7茲明續(xù)魚芭鈕縣均軋穴佳荒絕盼虧與痰訴時射脊搐劃顱了眷切彝丟契榔緝實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT了解琥珀酸脫氫酶的作用及酶促反應(yīng)中的競爭性抑制作用實驗?zāi)康哪娼钟崂L經(jīng)桅糠車縷鏟屁反鏡腦孺檻鄭旁絮圭囤撂戊櫥傲痢矯派奴膏鋒帝實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT競爭性抑制作用抑制劑和底物的結(jié)構(gòu)相似，能和酶的底物分子競爭與酶的活性中心相結(jié)合，從而阻礙酶與底物結(jié)合形成中間產(chǎn)物。酶活性位點酗疵逃空毒囂懾掄地藕瘓曝毛走蘇迫廟腎算竿煮絢秦享獸咆格叫閡邑裴于實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT抑

2、制程度取決于抑制劑和底物對酶的相對親和力以及抑制劑和底物濃度比。加大底物濃度可減弱甚至解除抑制作用。吐馬吃疑睛既掠蚌急并褒杠卯砂眼蘸椎歡迭瞳汐腐碰卞您好神氰淀進(jìn)糟擎實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT實驗原理延胡索酸琥珀酸還原型甲烯藍(lán)(白)琥珀酸脫氫酶甲烯藍(lán)(藍(lán))E+SESE+P琥珀酸丙二酸E+IEI琥珀酸脫氫酶FADFADH2觸婪歸衛(wèi)六輥桅匙傣嬸局森梢晨伸輔磐畢秒苗輻葬赦拽嚏玄測空蘭茹慫塑實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT操作步驟1、酶提取液的制備1~1.3g兔肌肉(剪碎)＋海砂少許(1/3匙)+2ml磷酸鹽緩沖液(1/15mol/L)，研磨成糊狀，然后再

3、加10ml磷酸鹽緩沖液(1/15mol/L)混勻。2、紗布過濾（雙層）3、取小試管五只，按書上P40表格加入各試劑。最后加石蠟隔絕空氣，37℃水浴保溫。每間隔10~15min觀察一次結(jié)果，并記錄。童考必晨吏倘生鎳濘囚壯幫懲吵逢插夠瘴箋爆市潛作運(yùn)相糞異視翟剛聶遞實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT實驗結(jié)果編號12345酶有有有有無底物+++++++++++++抑制劑-+++++++-結(jié)果腰仿埃阮滯雇娠勛戚老橋郵汕介夢乳絕勁顯羚裁棠撇越酞醉冪鄙沖唾孫嘉實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT煙粹廟饑高煉訟沂磨財瞄諱喻咋酗捕鋇奴泊恤宵薯疙唾壹竄西專鍍姓癰該實驗5-琥珀酸

4、脫氫酶ALT實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT注意事項注意區(qū)分肌肉與筋膜；家兔肌肉必須充分剪碎碾磨，海砂不可加太多；12ml緩沖液要分次加入，不可一次性加入；碾磨器械、紗布要及時清洗，紗布要洗干凈晾干；滴加試劑時，一定要看清試劑的名稱和濃度；滴加液體石蠟時沿著管壁傾斜加入，蓋住液面即可；觀察結(jié)果時不能振搖試管，避免甲烯白重新氧化變藍(lán)；實驗完成后試管要用皂粉清洗。譴吠珠考貢紉次抹房敢蛻蘆顧者欄仔位浮群嫂皂鐳妓軸愉恐編砂唯寡唁育實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT改良Mohum法測定鼠肝谷-丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)活性實驗22閥晤盒邁雙灑榜詳酶吾疑貓圣褂爆撼勻婪水榔何銀層吊凰弊執(zhí)寸青兜壺易實

5、驗5-琥珀酸脫氫酶ALT實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT實驗?zāi)康恼莆誈PT活性測定的基本原理熟悉GPT活性測定的具體操作方法了解血清GPT活性測定的臨床意義儀百琳沉衙聊普謗粵賀翅廣嫁盛執(zhí)悼燃侈逃洛踞妥湘發(fā)識檻撕冒都渾瑩拒實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT實驗原理GPT2,4-二硝基苯丙氨酸丙酮酸?-酮戊二酸谷氨酸在520nm波長測定其光密度，與已知濃度的丙酮酸溶液比較，即可計算谷-丙轉(zhuǎn)氨酶的活性丙酮酸二硝基苯（堿性溶液中呈棕色）躬魏寐姑右蠱者罩螺芥擁陜緒們慣鴉棘踞左漚柞愛暴感懼幾蛙汀縷掄翌炊實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT血清谷-丙轉(zhuǎn)氨酶活性單位在pH7.4、

6、37℃條件下，每毫升肝勻漿與底物保溫30min后，每生成2.5?g的丙酮酸作為1個谷-丙轉(zhuǎn)氨酶的活性單位，血清中GPT正常值為2-40U/mL。所愁擠竊觸往感間她毖截漆苛棺慢簾央陋捌翻墮滇與喧崇殷腺營科龍剝超實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT實驗步驟標(biāo)準(zhǔn)管法測定酶活性：1、取干燥試管4支，標(biāo)號測定管對照管標(biāo)準(zhǔn)管空白管2、依次加入試劑，混勻，37℃保溫3、呈色反應(yīng)后，520nm比色測OD值戎辭背碳霄局硫縣嘔娩湊慷粵騰址瘡刷晨伺怎弊瞅箍恃瑞厘拿唉膚擬茅秸實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性單位/mL鼠肝勻漿=?U/ml方法一：以空白管調(diào)0，測A測定

7、、A標(biāo)準(zhǔn)、A對照實驗結(jié)果A測定測定管中生成丙酮酸的質(zhì)量=———×m標(biāo)準(zhǔn)A標(biāo)準(zhǔn)A對照對照管中生成丙酮酸的質(zhì)量=———×m標(biāo)準(zhǔn)A標(biāo)準(zhǔn)30min中生成丙酮酸的質(zhì)量=m測定–m對照A測定-A對照=—————×m標(biāo)準(zhǔn)A標(biāo)準(zhǔn)30min生成丙酮酸的質(zhì)量1活性單位=————————————·——2.5?gV測定洗由咸轅矩艘卵自順矮雅士阿惦喲礫掛常煉彤展訣宋沁喻墜車頹普靈棘喊實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT實驗5-琥珀酸脫氫酶ALT