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1、葉綠素含量測定原理葉綠素約占總干重的1%，含a、b、c、d四種，高等植物含a、b兩種，光、溫度、營養(yǎng)元素氧、水是葉綠素合成的重要環(huán)境因子。葉綠素是雙羧酸酯，不溶于水，通常用含少量水的有機(jī)溶劑如80%的丙酮或95%的乙醇來提取葉片中的葉綠素，這是因為葉綠素與蛋白質(zhì)結(jié)合很牢固，需要經(jīng)過水解作用才可被提取出來。已知葉綠素a、b的95%乙醇提取液最大吸收峰的波長分別為665nm和649nm，用95％乙醇研磨法和浸泡法提取葉綠素，以提取試劑95％乙醇為對照,用分光光度計分別測定649nm、665nm處的吸光度并計算葉綠素濃度，計算公式為：Ca＝13.95D665－
2、6.88D649；Cb＝24.96D649－7.32D665；CT＝Ca＋Cb(注：Ca：葉綠素a的含量；Cb：葉綠素b的含量；CT：總?cè)~綠素的含量)儀器：研缽、25mL容量瓶、漏斗、剪刀、濾紙、722光柵分光光度計、具塞試管試劑：95%乙醇（AR）丙酮（AR）1:1、碳酸鈣（AR）、石英砂（AR）實(shí)驗方法稱取小麥葉片0.2g剪碎置于研缽中，加少許CaCO3，石英砂、95%乙醇充分研磨，過濾，將濾液移入25mL容量瓶，用95%乙醇（AR）丙酮（AR）1:1反復(fù)洗滌殘渣、濾紙至無綠色，合并濾液，定容。取上述提取液1mL稀釋至10mL，搖勻。以95%乙醇為參
3、照，在分光光度計665nm/649nm下測其光密度。Chla含量（mg/g）=(13.95D665－6.88D649)V/(W1000)Chlb含量（mg/g）=（24.96D649－7.32D665）V/(W1000)式中：A--測定波長下的光密度值V--葉綠素提取液總體積（mL）（若用的稀釋液，則應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)）W—材料鮮重（g）含量：mg/g=（濃度*提取體積*稀釋倍數(shù)）/樣品鮮重（植物生理學(xué)實(shí)驗指導(dǎo)李玲）參考文獻(xiàn)《化學(xué)生態(tài)學(xué)實(shí)驗指導(dǎo)書》-王晗光編寫SOD的測定原理：SOD可催化下列反應(yīng)：儀器：高速冷凍臺式離心機(jī)；分光光度計；移液器；光照培養(yǎng)箱；指
4、形管；研缽試劑：1.50mmol/L磷酸緩沖液(pH7．8)2.130mmol/L甲硫氨酸(Met)溶液：稱取1.9339gMet用磷酸緩沖液溶解定容至100mL3.750/LNBT（氮藍(lán)四唑）溶液：稱取0.06133gNBT用磷酸緩沖液溶解定容至100mL，避光保存4.20L核黃素溶液：稱取0．0750g核黃素用磷酸緩沖液溶解定容至l00mL，吸取1mL定容至100mL即可，隨用隨配，避光保存5.100mol/LEDTA-Na2溶液：稱取0．0372gEDTA-Na2·2H20，用磷酸緩沖液溶解并定容至100mL，吸取10mL定容至100mL即可。6.
5、SOD提取介質(zhì)：50mmol/L磷酸緩沖液(pH7．8)內(nèi)含1％聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。(材料)正常生長或經(jīng)逆境處理的植物組織器官實(shí)驗方法：1.取小麥葉片(去葉脈)0.5g于預(yù)冷的研缽中，加1mL磷酸緩沖液在冰浴下研磨成勻漿，倒入10mL刻度試管中，加緩沖液定容為5mL。取2mL于離心管離心20min，上清液即為SOD粗提液。2.每個樣品取8個潔凈干燥的微燒杯(透明度好)編號，按表加入各試劑，反應(yīng)系統(tǒng)總體積為3mL。其中4～8號管中磷酸緩沖液和酶液的加入量依樣品中的酶活性進(jìn)行調(diào)整，如果酶活性強(qiáng)時，可適當(dāng)減少酶液用量。試劑全部加入后混勻，將1號杯置于暗處
6、，其余各杯均于25℃、4000lx日光燈下反應(yīng)20min，各管受光情況要一致。溫度高時，時間縮短；溫度低時，時間延長，然后立即遮光停止反應(yīng)。反應(yīng)系統(tǒng)中各試劑用量在560nm波長下，以1號杯調(diào)零，測定其余各杯反應(yīng)體系的吸光度。以2、3號杯吸光度的平均值作為還原率的100％，分別計算不同酶液量抑制NBT光還原的相對百分率。以酶液用量(pL)為橫坐標(biāo)，以NBT光化還原的抑制率(％)為縱坐標(biāo)繪制二者相關(guān)曲線，NBT光化還原被抑制50％的酶液量為一個酶活單位。SOD總活性[u/g]=SOD比活性[u/mg]=：照光對照管的吸光度：樣品管的吸光度：樣品液總體積（ml
7、）：樣品鮮重（g）：測定時樣品用量（g）參考文獻(xiàn)《植物生理學(xué)實(shí)驗教程》-張立軍，樊金娟主編2007《基礎(chǔ)生物學(xué)實(shí)驗教程》-王德良，周小慧主編2006POD的測定原理：過氧化物酶是植物體內(nèi)普遍存在的、活性較高的一種酶，它與呼吸作用、光合作用及生長素的氧化等都有密切關(guān)系。在植物生長發(fā)育過程中，它的活性不斷發(fā)生變化。因此測量這種酶，可以反映某一時期植物體內(nèi)代謝的變化。在有過氧化氫存在的條件下，過氧化物酶能使愈創(chuàng)木酚氧化，生成茶褐色物質(zhì)。該物質(zhì)在470nm處有最大吸收，可用分光光度計測量470nm處的吸光度變化速率來測定過氧化物酶的活性。儀器：研缽，恒溫水浴鍋，
8、25mL容量瓶，吸管，高速冷凍離心機(jī)，秒表，磁力攪拌器試劑：1.愈創(chuàng)木酚2.30
