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《植物生理指標(biāo)測(cè)定方法》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、實(shí)驗(yàn)一植物葉綠素含量的測(cè)定（分光光度法）(張憲政，1992)一、原理???根據(jù)葉綠體色素提取液對(duì)可見光譜的吸收，利用分光光度計(jì)在某一特定波長(zhǎng)測(cè)定其吸光度，即可用公式計(jì)算出提取液中各色素的含量。根據(jù)朗伯—比爾定律，某有色溶液的吸光度A與其中溶質(zhì)濃度C和液層厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常數(shù)。當(dāng)溶液濃度以百分濃度為單位，液層厚度為1cm時(shí)，α為該物質(zhì)的吸光系數(shù)。各種有色物質(zhì)溶液在不同波長(zhǎng)下的吸光系數(shù)可通過測(cè)定已知濃度的純物質(zhì)在不同波長(zhǎng)下的吸光度而求得。如果溶液中有數(shù)種吸光物質(zhì)，則此混合液在某一波長(zhǎng)下的總吸光度等于各組分在相應(yīng)波長(zhǎng)下吸光度的
2、總和。這就是吸光度的加和性。今欲測(cè)定葉綠體色素混合提取液中葉綠素a、b和類胡蘿卜素的含量，只需測(cè)定該提取液在三個(gè)特定波長(zhǎng)下的吸光度A，并根據(jù)葉綠素a、b及類胡蘿卜素在該波長(zhǎng)下的吸光系數(shù)即可求出其濃度。在測(cè)定葉綠素a、b時(shí)為了排除類胡蘿卜素的干擾，所用單色光的波長(zhǎng)選擇葉綠素在紅光區(qū)的最大吸收峰。高等植物中葉綠素有兩種：葉綠素a和b，兩者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。葉綠素a和葉綠素b的比值反映植物對(duì)光能利用效率的大小，比值高則大，則反之。二、材料、儀器設(shè)備及試劑??試劑：1）95%乙醇（或80%丙酮）三、實(shí)驗(yàn)步驟??????稱取剪碎的新鮮樣品
3、0.2～0.3g，加乙醇10ml，提取直至無綠色為止。把葉綠體色素提取液倒入光徑1cm的比色杯內(nèi)，以95%乙醇為空白，在波長(zhǎng)663nm和645nm下測(cè)定吸光度。????四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果按計(jì)算丙酮法（Arnon法）【可以用于丙酮乙醇混合法和80%丙酮提取法的計(jì)算】葉綠素a的含量（mg/g）=（12.71′OD663?–2.59′OD645）V/1000*W葉綠素b的含量（mg/g）=(22.88OD645?–4.67OD663)V/1000*W葉綠素a、b的總含量（mg/g）=(8.04′OD663?+20.29′OD645)V/1000*W按In
4、skeep公式葉綠素a的含量（mg/g）=（12.63′OD663?–2.52′OD645）V/1000*W葉綠素b的含量（mg/g）=(20.47OD645?–4.73OD663)V/1000*W葉綠素a、b的總含量（mg/g）=(7.90′OD663?+17.95′OD645)V/1000*W注：1、葉綠素a和葉綠素b的比值反映植物對(duì)光能利用率【1】比如陽生植物葉綠素a和葉綠素b的比值較大 【2】陰生植物葉綠素a和葉綠素b的比值較小2、丙酮-------熔點(diǎn):-94℃；沸點(diǎn):56.48℃；是一種無色透明液體，有特殊的辛辣氣味易溶于水和甲醇
5、、乙醇、乙醚、氯仿、吡啶等有機(jī)溶劑.下一步實(shí)驗(yàn)方法比較【1】95%乙醇直接提?。ā蹋?】95%乙醇加熱提?。T瑞云，1985）【3】無水酒精和80%丙酮等體積混合提取實(shí)驗(yàn)二、不良環(huán)境對(duì)植物細(xì)胞膜的傷害（(張憲政，1992)）一、原理13植物組織在受到各種不利的環(huán)境條件（如干旱、低溫、高溫、鹽漬和大氣污染）危害時(shí)，細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能首先受到傷害，細(xì)胞膜透性增大。若將受傷害的組織浸入無離子水中，其外滲液中電解質(zhì)的含量比正常組織外滲液中含量增加，組織受傷害越嚴(yán)重，電解質(zhì)含量增加越多。用電導(dǎo)儀測(cè)定外滲液電導(dǎo)率的變化，可反映出質(zhì)膜受傷害的程度。在電解
6、質(zhì)外滲透的同時(shí)，細(xì)胞內(nèi)可溶性有機(jī)物也隨之滲出，引起外滲液可溶性糖、氨基酸、核苷酸等含量增加，氨基酸和核苷酸對(duì)紫外光有吸收，對(duì)紫外分光光度計(jì)測(cè)定受傷害組織外滲液消光值，同樣可反映出質(zhì)膜受傷害的程度。用電導(dǎo)儀法和紫外法測(cè)定結(jié)果有很好的一致性。二、方法步驟1、取樣及處理采用電導(dǎo)法(張憲政，1992)：將選取的幼嫩葉片和成熟葉片剪下，包在密封袋內(nèi)置于冰盒中帶回實(shí)驗(yàn)室。將新鮮的葉樣先用自來水輕輕沖洗葉片，除去表面沾污物，再用去離子水沖洗1~2次，用濾紙輕輕吸干葉片表面水分，稱0.2～0.3g并剪成切段，放入50mL帶塞試管中，加入20mL去離子H2O，
7、浸沒樣品4~5h，各處理浸泡時(shí)間和測(cè)定溫度一致，在室溫下進(jìn)行，用DDs?11型電導(dǎo)儀測(cè)其電導(dǎo)率，然后沸水浴15min，冷卻至室溫再測(cè)一次總電導(dǎo)率值。以相對(duì)電導(dǎo)率表示細(xì)胞質(zhì)膜透性大小。2、計(jì)算：植物組織浸泡的電導(dǎo)率，特稱外滲電導(dǎo)率，此測(cè)定方法稱外滲電導(dǎo)率法。（1）外滲電導(dǎo)率K（us/cm*g)=SQ=測(cè)定電導(dǎo)率/稱取質(zhì)量或K（us/cm*g*ml）=SQ=測(cè)定電導(dǎo)率/稱取質(zhì)量*量取體積（2）相對(duì)電解質(zhì)滲出率.電解質(zhì)滲出率（%）=L1（浸泡液電導(dǎo)率）/L2（煮沸后電導(dǎo)率）×100電解質(zhì)滲出率(%)=L1(浸泡液電導(dǎo)率)-本底電導(dǎo)率/[L2（煮沸后
8、電導(dǎo)率）-本底電導(dǎo)率]×100式中：L1：組織殺死前外滲液的電導(dǎo)值；L2組織殺死后外滲液的電導(dǎo)值。注：1、事先測(cè)定水的電導(dǎo)率2、用吸水紙吸干探頭的水分實(shí)驗(yàn)三植物體內(nèi)
