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1、第二章血液一般檢驗(yàn)血常規(guī)檢驗(yàn)報(bào)告單第三節(jié)紅細(xì)胞檢驗(yàn)一、紅細(xì)胞計(jì)數(shù) 二、血紅蛋白測(cè)定三、血細(xì)胞比容測(cè)定 四、紅細(xì)胞平均指數(shù)五、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)本節(jié)內(nèi)容六、紅細(xì)胞沉降率測(cè)定七、紅細(xì)胞形態(tài)檢查一、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）是測(cè)定單位容積血液中紅細(xì)胞數(shù)量。RBC與血紅蛋白和血細(xì)胞比容結(jié)合，常作為診斷貧血、真性紅細(xì)胞增多癥及紅細(xì)胞增多的主要指標(biāo)之一。（一）檢測(cè)原理顯微鏡法的檢測(cè)原理：采用等滲稀釋液將血液標(biāo)本稀釋一定倍數(shù)（200倍）后，充入改良牛鮑血細(xì)胞計(jì)數(shù)板中，在顯微鏡下計(jì)數(shù)一定區(qū)域（體積）內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)量，經(jīng)換算求出每升血液中紅細(xì)胞數(shù)量。（二）操作步
2、驟顯微鏡法準(zhǔn)備稀釋液：取一試管，加入紅細(xì)胞稀釋液2ml。采血和加血：準(zhǔn)確采集末梢血或吸取新鮮靜脈抗凝血10μl，加至上述稀釋液中，立即混勻。充池：準(zhǔn)備計(jì)數(shù)板、充分混勻稀釋液、充池，室溫靜置2～3min，待細(xì)胞下沉。計(jì)數(shù)：高倍鏡下計(jì)數(shù)中央大方格內(nèi)4角和正中5個(gè)中方格內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)。計(jì)算：（三）方法評(píng)價(jià)常用紅細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液組成與作用（四）質(zhì)量保證血細(xì)胞計(jì)數(shù)質(zhì)量保證的關(guān)鍵是控制計(jì)數(shù)誤差。血細(xì)胞計(jì)數(shù)誤差可來(lái)源于技術(shù)誤差、儀器誤差和技術(shù)域誤差，可通過(guò)減小誤差進(jìn)行紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的質(zhì)量控制。血細(xì)胞計(jì)數(shù)誤差種類與原因（五）參考區(qū)間成年：男性（4.0～5.5）×1012/L，
3、女性（3.5～5.0）×1012/L。新生兒（6.0～7.0）×1012/L。（六）臨床意義1．生理性變化紅細(xì)胞數(shù)量受到許多生理因素影響，但與相同年齡、性別人群的參考區(qū)間相比，一般在±20%以內(nèi)。紅細(xì)胞生理性變化與臨床意義2．病理性變化（1）病理性增多（2）病理性減少：見(jiàn)于各種原因?qū)е碌呢氀氀侵竿庵苎袉挝惑w積內(nèi)血紅蛋白（Hb）、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）和（或）血細(xì)胞比容（HCT）低于參考區(qū)間下限。病因不同可將貧血分為3大類。此外，藥物也可引起貧血。1）紅細(xì)胞生成減少：①骨髓功能衰竭的再生障礙性貧血、急性造血功能停滯等。②造血物質(zhì)缺乏或利用障礙，如腎性
4、貧血、缺鐵性貧血（鐵缺乏）、鐵粒幼細(xì)胞貧血（鐵利用障礙）、巨幼細(xì)胞貧血（葉酸、維生素B12缺乏性DNA合成障礙）等。2）紅細(xì)胞破壞過(guò)多3）紅細(xì)胞丟失（失血）：如急性、慢性失血性貧血。紅細(xì)胞破壞過(guò)多的原因與臨床意義引起貧血的藥物與機(jī)制二、血紅蛋白測(cè)定（Hb或HGB）血紅蛋白是在人體有核紅細(xì)胞及網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)合成的一種含色素輔基的結(jié)合蛋白質(zhì)，是紅細(xì)胞內(nèi)的運(yùn)輸?shù)鞍?。每個(gè)Hb分子含有4條珠蛋白肽鏈，每條肽鏈結(jié)合1個(gè)亞鐵血紅素，形成具有四級(jí)空間結(jié)構(gòu)的四聚體，以利于結(jié)合O2和CO2。（一）檢測(cè)原理HiCN法檢測(cè)原理：血紅蛋白（SHb除外）中的亞鐵離子（Fe2+）被高
5、鐵氰化鉀氧化為高鐵離子（Fe3+），血紅蛋白轉(zhuǎn)化成高鐵血紅蛋白（Hi）。Hi與氰化鉀（KCN）中的氰離子反應(yīng)生成HiCN。HiCN最大吸收波峰為540nm，波谷為504nm。在特定條件下，HiCN毫摩爾消光系數(shù)為44L/（mmol?cm）。HiCN在540nm處的吸光度與濃度成正比，根據(jù)測(cè)得吸光度可求得血紅蛋白濃度。十二烷基硫酸鈉血紅蛋白（SDS-Hb）檢測(cè)原理：SDS作為一種陰離子表面活性劑，具有輕度氧化作用。血液中除SHb以外的所有血紅蛋白均可與低濃度的SDS作用，亞鐵血紅素被氧化成穩(wěn)定的棕紅色高鐵血紅素樣復(fù)合物（SDS-Hb），最大吸收峰在538
6、nm。（二）操作步驟1、氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法（直接定量測(cè)定法）準(zhǔn)備轉(zhuǎn)化液：取一試管，加入5mlHiCN轉(zhuǎn)化液。采血與轉(zhuǎn)化：采集全血20μl，加到盛有轉(zhuǎn)化液的試管底部，與轉(zhuǎn)化液充分混勻，靜置5min。測(cè)定吸光度：用符合WHO標(biāo)準(zhǔn)的分光光度計(jì)，在波長(zhǎng)540nm處、光徑為1.000cm、以HiCN試劑調(diào)零，測(cè)定標(biāo)本的吸光度（A）。計(jì)算：2．十二烷基硫酸鈉血紅蛋白測(cè)定法制備標(biāo)準(zhǔn)曲線：取4份不同濃度抗凝血分別用HiCN法及本法測(cè)定每份血液的血紅蛋白濃度和吸光度，以HiCN法測(cè)得的血紅蛋白濃度為橫坐標(biāo)，本法測(cè)得的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定：取應(yīng)用液5ml
7、于試管中，加入全血20μl充分混勻。5min后置538nm下以應(yīng)用液調(diào)零，測(cè)定其吸光度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線即可得出血紅蛋白濃度。（三）方法學(xué)評(píng)價(jià)HiCN測(cè)定法是WHO和國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)ICSH推薦的參考方法，由于HiCN試劑含有劇毒的氰化鉀，各國(guó)均相繼研發(fā)出不含氰化鉀的血紅蛋白測(cè)定方法，有的測(cè)定法已用于血液分析儀，但其標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)溯源到HiCN量值。血紅蛋白測(cè)定的方法學(xué)評(píng)價(jià)HiCN轉(zhuǎn)化液的作用與評(píng)價(jià)（四）質(zhì)量保證（五）參考區(qū)間成年：男性120～160g/L，女性110～150g/L。新生兒：170～200g/L。（六）臨床意義與紅細(xì)胞計(jì)數(shù)相似，但判斷貧血程度優(yōu)
8、于紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。根據(jù)Hb濃度可將貧血分為4度：輕度貧血：Hb＜120g/L（女性Hb＜110g/
