淀粉酶含量測定.doc

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1、淀粉酶(AMS)測定試劑盒說明書(碘-淀粉比色法)一、原理：淀粉酶能水解淀粉生成葡萄糖、麥芽糖及糊精，在底物濃度已知并且過量的情況下，家人碘液與未水解的淀粉結(jié)合生成藍(lán)色復(fù)合物，根據(jù)藍(lán)色的深淺可推算出水解的淀粉量，從而計(jì)算出AMS的活力。二、試劑組成與配制：（100T）1、0.4mg/ml底物緩沖液：60ml×1瓶，4℃冰箱保存6個(gè)月。2、0.1mol/L碘貯備液：7ml×1瓶，4℃避光保存6個(gè)月。0.01mol/L碘應(yīng)用液的配制：將碘貯備液：蒸餾水=1:9稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配4℃避光保存。三、操作表：測定管（u管）空白管（0管）底物緩沖液（ml）37℃預(yù)溫5分鐘0.50.5待測樣本（ml）0.1混

2、勻，37℃水浴，準(zhǔn)確反應(yīng)7.5分鐘碘應(yīng)用液（ml）0.50.5蒸餾水（ml）3.03.1混勻，660nm波長，1cm光徑，蒸餾水調(diào)零，測各管吸光度。*注：不同樣本批量測試前需要做預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定最佳取樣濃度，將（空白OD-測定OD控制在0.05～0.150之間）四、計(jì)算：1、單位定義：100ml血清（漿）中的AMS，在37℃與底物作用30分鐘，水解10mg淀粉為1個(gè)單位。2、公式：（此公式適用于測定血清中淀粉酶）血清淀粉酶的含量測定一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：1、實(shí)驗(yàn)器材：移液槍（100~1000ul、10~100ul、1000~5000ul、2~20ul）、5mlEP管、0.5mlEP管、比色皿、100ml

3、燒杯、漩渦儀、水浴箱，分光光度計(jì)、計(jì)時(shí)器。2、實(shí)驗(yàn)藥品：NaCl、蒸餾水、0.4mg/ml底物緩沖液、0.1mol/L碘貯備液。二、實(shí)驗(yàn)步驟：1、0.01mol/L碘應(yīng)用液的配制：將碘貯備液：蒸餾水=1:9稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配4℃避光保存。2、生理鹽水的配置：稱取9gNaCl置100ml燒杯，加入100ml蒸餾水，溶解即得。3、樣品最佳取樣濃度摸索：取待測血清用生理鹽水稀釋成不同比例（2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍、128倍、256倍等倍數(shù)進(jìn)行稀釋），取0.1ml進(jìn)行檢測。取兩個(gè)5mlEP管，標(biāo)記為空白、血清所稀釋的倍數(shù)，分別加入底物緩沖液0.5ml，其中帶有倍數(shù)的EP管加入相應(yīng)的稀釋好

4、的血清0.1ml，于漩渦儀上混勻，同時(shí)放入37℃水浴箱反應(yīng)7.5分鐘，取出后各加入0.5ml0.01mol/L碘應(yīng)用液，空白管加入3.1ml蒸餾水，帶有倍數(shù)的EP管加入3.1ml蒸餾水，混勻，蒸餾水調(diào)零，迅速于660nm波長測定吸光度，控制空白OD-測定OD在0.05~0.150之間。4、樣品測定：將所需測定樣品按摸索確定的倍數(shù)稀釋，同法測定吸光度，記錄數(shù)據(jù)。5、數(shù)據(jù)處理：按給定公式計(jì)算待測血清淀粉酶含量。注：加入碘應(yīng)用液后不能長時(shí)間放置，否則碘見光分解后影響測定結(jié)果