吖啶橙染色試劑盒.doc

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1、吖啶橙染色試劑盒簡介：吖啶橙(AcridineOrange,AO)屬于三環(huán)雜芳香燃料，可以標(biāo)記DNA、RNA，屬于異染性熒光染料。該染料具有膜通透性，能透過細(xì)胞膜，使核DNA和RNA染色。因此AO常用于細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA進(jìn)行檢測。AO與核酸結(jié)合方式主要有：1、插入性結(jié)合，AO嵌入核酸雙鏈的堿基對之間，這種結(jié)合方式主要為AO與DNA的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為530nm，激發(fā)后呈綠色熒光；2、靜電吸引，帶正電荷的AO與單鏈核酸的磷酸根(帶負(fù)電荷)產(chǎn)生靜電間的吸引結(jié)合，這種結(jié)合方式主要為AO與RNA的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為640nm，激發(fā)

2、后呈紅色熒光，少量結(jié)合會呈桔黃色或桔紅色熒光。因此，吖啶橙嵌合到雙鏈DNA分子中顯綠色，與DNA單鏈或RNA結(jié)合時(shí)發(fā)桔黃色或橙紅色熒光。Leagene吖啶橙染色試劑盒(AcridineOrangeDetectionKit)主要由AOStain、AOStainBuffer組成，常用于細(xì)胞凋亡的檢測。染色后在熒光顯微鏡下觀察，吖啶橙可透過正常細(xì)胞膜，使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光；而在凋亡細(xì)胞中，因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體。吖啶橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光或黃綠色碎片顆粒；而壞死細(xì)胞黃熒光減弱甚至消失。吖啶橙

3、染色常與EB染色合用雙染，EB只染死細(xì)胞使之產(chǎn)生桔黃色熒光，由此可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。組成：編號名稱DA0037100TStorage試劑(A):AOStain500μl4℃避光試劑(B):AOStainBuffer(10×)10ml4℃使用說明書1份自備材料：1、熒光顯微鏡2、低速離心機(jī)3、PBS4、細(xì)胞計(jì)數(shù)板5、載玻片、蓋玻片操作步驟(僅供參考)：(一)AO單獨(dú)染色1、收集細(xì)胞(采用流式細(xì)胞儀檢測時(shí)，應(yīng)先固定細(xì)胞)，用AOStainBuffer(1×)清洗細(xì)胞，加入適量的AOStainBuffer(1×)重懸

4、細(xì)胞，計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至106/ml。1、取適量的細(xì)胞懸液和AOStain，細(xì)胞懸液:AOStain按照一定的比例混合，輕輕混勻。如果采用熒光顯微鏡下觀察，取l細(xì)胞懸液和5μlAOStain混合即可。2、室溫避光染色，滴加于載玻片上并加蓋玻片或上流式細(xì)胞儀分析。3、熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長，阻斷濾光片波長)，計(jì)數(shù)并拍照。染色結(jié)果正常細(xì)胞細(xì)胞被均勻染成黃綠色熒光凋亡細(xì)胞染色質(zhì)濃縮，細(xì)胞核碎裂成點(diǎn)狀，被染成大小不一、致密濃染的綠色顆粒(二)AO/EB雙染色1、收集細(xì)胞，用AOStainBuffer(1×)清洗細(xì)胞，加入適量

5、的AOStainBuffer(1×)重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至106/ml。2、取適量的細(xì)胞懸液和AOStain，細(xì)胞懸液:AOStain按照一定的比例混合，并加入適量EB染色液，輕輕混勻。如果采用熒光顯微鏡下觀察，取細(xì)胞懸液和5μlAOStain混合即可。3、室溫避光染色，滴加于載玻片上并加蓋玻片4、熒光顯微鏡濾光片觀察，計(jì)數(shù)并拍照。染色結(jié)果正常細(xì)胞均勻染成綠色熒光壞死細(xì)胞細(xì)胞桔黃色熒光凋亡細(xì)胞染色質(zhì)濃縮，細(xì)胞核碎裂，被染成大小不一、致密濃染的黃綠色顆?；蛞姲|(zhì)芽狀突起。計(jì)算細(xì)胞凋亡率和死亡率:???????注意事項(xiàng)：1、

6、吖啶橙染色常與EB染色合用，可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。2、如有低溫離心機(jī)進(jìn)行離心效果更佳，同時(shí)應(yīng)注意減少試劑暴露于強(qiáng)光下的時(shí)間。3、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。有效期：6個(gè)月有效。