《細菌學(xué)檢驗概論》PPT課件

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1、臨床細菌學(xué)檢驗概述IntroductiononClinicandDiagnosticBacteriology江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院檢驗學(xué)系病原生物學(xué)教研室周天戟教授9/14/20211本章內(nèi)容第一節(jié)標(biāo)本的采集和處理原則第二節(jié)細菌的形態(tài)學(xué)檢查第三節(jié)細菌的分離培養(yǎng)和鑒定第四節(jié)細菌的非培養(yǎng)檢測方法9/14/20212第一節(jié)標(biāo)本的采集和處理原則一、標(biāo)本采集的一般原則1．早期采集2．無菌操作3．根據(jù)目的菌的特性用不同的方法采集4．采集量適當(dāng)5．注意生物安全9/14/20213第一節(jié)標(biāo)本的采集和處理原則二、標(biāo)本的處理1.對環(huán)境敏感的細菌

2、如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血桿菌等應(yīng)保溫并立即送檢2.其他各種標(biāo)本采集后最好在2h之內(nèi)送到實驗室3.若不能及時送檢，標(biāo)本應(yīng)置于一定環(huán)境中保存4.一般情況下，用于細菌培養(yǎng)的標(biāo)本保存時間不應(yīng)超過24h9/14/20214５.病人標(biāo)本中可能含有大量致病菌，必須注意安全防護６.標(biāo)本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必須包裝好，防止送檢過程中倒翻或碰破流出７.對于烈性傳染病標(biāo)本運送時更要特別嚴(yán)格，必須按規(guī)定包裝，由專人運送８.厭氧性標(biāo)本應(yīng)放在專門的運送瓶或試管內(nèi)運送，有時可直接用抽取標(biāo)本的注射器運送9/14/20215藥物

3、敏感試驗標(biāo)本直接涂片鏡檢分離培養(yǎng)形態(tài)學(xué)試驗生化試驗免疫學(xué)試驗動物試驗明確診斷初步診斷免疫學(xué)試驗分子生物學(xué)技術(shù)其他檢測技術(shù)細菌感染的檢驗程序輔助診斷9/14/20216第二節(jié)細菌的形態(tài)學(xué)檢查1.鏡檢可以了解有無細菌及大致的菌量2.通過形態(tài)學(xué)檢查可得到初步診斷，對臨床早期診斷和治療疾病有一定的參考意義3.根據(jù)細菌形態(tài)、結(jié)構(gòu)和染色性有助于對病原菌的初步識別和分類，用于細菌鑒定細菌形態(tài)學(xué)檢查的意義9/14/20217不染色標(biāo)本的檢查：初步觀察、細菌動力單染色法：細菌形態(tài)復(fù)染色法：細菌形態(tài)、結(jié)構(gòu)與鑒別革蘭染色法（Gramsta

4、in）抗酸染色法（acid-faststain）特殊染色法：負染色、鞭毛染色細菌的形態(tài)學(xué)檢查法9/14/20218一、不染色標(biāo)本1.細菌不經(jīng)染色直接鏡檢，主要用于檢查生活狀態(tài)下細菌的動力及運動狀況2.常用的方法有壓滴法和懸滴法有動力：可看到細菌自一處移至另一處，有明顯的方向性位移無動力：細菌呈現(xiàn)布朗運動，只在原地顫動而無位置的改變3.有些病原菌通過不染色標(biāo)本的動力檢查可作出初步鑒定如疑似霍亂患者，鏡下觀察到來回穿梭似流星狀運動的細菌，制動試驗陽性，可初步推斷為“疑似O1群霍亂弧菌”。9/14/20219二、染色標(biāo)本（

5、一）常用染料1．堿性染料：堿性復(fù)紅、結(jié)晶紫、美藍等2．酸性染料：有伊紅、剛果紅等3．復(fù)合染料（中性染料）及熒光染料：復(fù)合染料有瑞氏染料（伊紅美藍）、姬姆薩染料（伊紅天青）等；熒光染料有熒光標(biāo)記的抗體9/14/202110（二）常用的染色方法1．革蘭染色（gramstain）方法：1、結(jié)晶紫初染1min2、盧戈氏碘液媒染1min3、95％酒精脫色30sec～1min4、稀釋石炭酸復(fù)紅復(fù)染1min原理：G+等電點低，帶正電荷的堿性燃料作色牢固G+細胞壁肽聚糖層多，G-細胞壁脂質(zhì)含量高G+含有較多核糖核酸鎂鹽，與結(jié)晶紫、碘

6、結(jié)合成大分子復(fù)合物意義：鑒定細菌與致病性有關(guān)選擇抗菌藥物參考革蘭陰性桿菌革蘭陽性球菌9/14/202111（二）常用的染色方法2．抗酸染色（acid-faststain）方法：1、石炭酸復(fù)紅初染加熱3~5min，水洗2、3%~5%鹽酸酒精脫色30s，水洗3、堿性美藍復(fù)染30s，水洗。原理：分枝桿菌屬的細菌，胞壁脂質(zhì)多，其中的分枝菌酸與石炭酸復(fù)紅結(jié)合成牢固的復(fù)合物，能抵抗脫色意義：可將細菌分為兩大類：-抗酸性細菌-非抗酸性細菌9/14/202112（二）常用的染色方法3．熒光染色（1）熒光染色法敏感性強，效率高而且容易

7、觀察結(jié)果，在臨床細菌鑒定中有很大的實用價值。（2）主要用于結(jié)核分枝桿菌、麻風(fēng)分枝桿菌、白喉棒狀桿菌及痢疾志賀菌等的檢測。4.鞭毛染色：可觀察到菌體上有無鞭毛、鞭毛的位置及數(shù)量，在細菌鑒定中，特別是非發(fā)酵菌的鑒定中很重要。5.異染顆粒染色：用于白喉棒狀桿菌染色。9/14/202113（二）常用的染色方法6.芽胞染色：7.墨汁染色:一般用于新型隱球菌檢查9/14/202114第三節(jié)細菌的分離培養(yǎng)和鑒定選擇培養(yǎng)基接種選擇培養(yǎng)方法選擇可疑菌落選擇鑒定方法9/14/202115細菌的分離培養(yǎng)和鑒定一、培養(yǎng)基的種類和選擇培養(yǎng)基的

8、組成成分、培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)基的選擇二、分離及培養(yǎng)細菌的分離、細菌培養(yǎng)方法三、生化反應(yīng)和鑒定碳水化合物的代謝試驗蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝試驗碳源和氮源利用試驗9/14/202116一、培養(yǎng)基的種類和選擇培養(yǎng)基（culturemedium）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)物制品。9/14/202117(一)培養(yǎng)基的組成成分1．營