生化藥物分析及生物檢定技術(shù)ppt課件.ppt

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1、定義：指運用生物化學(xué)的理論、方法和技術(shù)，從動、植物等生物體中提取分離的天然活性物質(zhì)，以及這些物質(zhì)及其衍生物的化學(xué)合化、半合成和現(xiàn)代生物技術(shù)制得的產(chǎn)品。生化藥物分析常測定：氨基酸及其衍生物、藥用活性多肽、藥用蛋白、藥用酶、輔酶、核酸及其降解產(chǎn)物和衍生物、多糖和脂類藥物、基因工程DNA重組藥物等。優(yōu)點：易被機體吸收，針對性強，療效可靠，毒副作用小，營養(yǎng)價值高等。一、生化藥物分析的特點1、分子量不確定性(1)只有氨基酸、核苷酸、輔酶、甾體激素等化學(xué)結(jié)構(gòu)明確的小分子化合物，分子量確定。(2)大多分子量不確定，結(jié)構(gòu)不確定因此，生化藥物常需進行純

2、度及分子量測定。2、分析項目的特殊性(1)除采用理化法分析外,尚需用生物檢定法進行檢定,以證實其生物活性(2)因易引入雜質(zhì)，常需做熱源、熱敏、異常毒性、安全性試驗(3)多用含量測定表示主藥含量，但酶類需進行效價/酶活力測定，來表示有效成分含量。3、分析方法的多樣性如：理化、生化、生物檢定法等。二、生化藥物分析的方法1、鑒別(1)化學(xué)反應(yīng)法(2)UV(3)酶法：如尿激酶-蛋白水解酶(4)電泳法：如肝素-糖凝膠電泳法(5)生物法：利用生物體進行試驗2、雜質(zhì)檢查(1)一般雜質(zhì)(2)特殊雜質(zhì)3、安全性檢查(1)熱原檢查：由微生物所分泌的某一種

3、代謝產(chǎn)物，一般以為是內(nèi)毒素，能使恒溫動物體溫升高。方法：家兔法/鱟試劑(2)異常毒性試驗用一定劑量藥物按指定的操作方法和給藥途徑給規(guī)定體重的試驗動物，觀察其急毒反應(yīng)(是否死亡)，是一個限度試驗。異常毒性試驗出現(xiàn)：主要取決于供試品在生產(chǎn)中是否引入，可發(fā)生異常毒性雜質(zhì)。(3)過敏試驗檢異性蛋白試驗----引起多種過敏反應(yīng)輕:皮膚產(chǎn)生紅斑/丘疹過敏重:窒息、發(fā)紺、血管神經(jīng)性水腫血壓降低、休克、死亡。(4)降壓物質(zhì)檢查指藥物中含有能導(dǎo)致血壓降低的雜質(zhì)，包括組胺、類組胺或其他物質(zhì)。來源：用動物臟器/組織制備時，在正常組織中存在。方法：貓/狗血壓

4、法檢藥物中所含降壓物質(zhì)。(5)無菌檢查對藥物及敷料是否染有活菌的檢查。由于許多生化藥物不能高溫滅菌，故檢查此項。4、含量/效價測定表示方法：(1)含量百分比：適用于化學(xué)結(jié)構(gòu)明確小分子/經(jīng)水解后變成小分子藥物。(2)生物效價/酶活力單位表示，適于酶類、蛋白質(zhì)類。常用方法：(1)酶法(2)電泳法(3)生物檢定法(4)理化法(1)酶法①酶活力測定法：a.終點法：單酶反應(yīng)定量法指示酶反應(yīng)偶聯(lián)定量法b.取樣測定法c.連續(xù)測定法②酶分析法：a.動力學(xué)分析法b.總變量分析法(2)電泳法①自由界面電泳法②高效毛細(xì)管電泳法③區(qū)帶電泳法a.紙電泳法b.醋

5、酸纖維素薄膜電泳法c.聚丙烯酰胺凝膠電泳法d.十二烷基硫酸鈉(SDS)聚丙烯酰胺凝膠電泳法(3)生物檢定法是利用藥物對生物體的作用以測定其效價或生物活性的一種方法。以藥物的藥理作用為基礎(chǔ)，生物統(tǒng)計為工具，運用特定的實驗設(shè)計，通過供試品和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吩谝欢l件下比較產(chǎn)生特定生物反應(yīng)的劑量比例，來測得供試品的效價。(4)理化法①重量法a.提取法b.揮發(fā)法c.沉淀法②測定法③比色法④UV⑤高效凝膠過濾色譜法a.分離根據(jù)有效粒徑b.分離在固定比例水液中c.活性蛋白可回收⑥高效離子交換色譜法a.分離根據(jù)離子化濃度b.分離鹽濃度增大的梯度

6、洗脫法c.分離在陽/陰離子交換間呈現(xiàn)差異大d.柱效中等并具高質(zhì)量的活性回收三、生化藥物分析進展總體向理化/儀器分析發(fā)展如：GC、HPLC、UV、TR、質(zhì)譜、磁共振、超離技術(shù)、放射免疫、酶試劑、酶電極檢測等。另，應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)，對生化藥的活力和效價檢測。單克隆體免疫分析技術(shù)及基因分析技術(shù)，提高檢測限量和靈敏度。生物檢定技術(shù)第一節(jié)微生物限度檢查一、定義微生物限度檢查法系檢查非規(guī)定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的方法。檢查項目包括細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)、酵母菌數(shù)及控制菌檢查。微生物限度檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的單向

7、流空氣區(qū)域內(nèi)進行，其全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止再污染。二、檢查方法藥品微生物限度檢查采用活菌計數(shù)，計數(shù)方法包括：平皿法、薄膜過濾法。一、平皿法1．設(shè)備、儀器及用具無菌室、超凈工作臺、恒溫培養(yǎng)箱(室)、勻漿儀、恒溫水浴箱、電熱干燥箱、冰箱、高壓蒸汽滅菌器、菌落計數(shù)器(JLQ-ST或JLQ-S2型)、顯微鏡(1500×)、天平(感量0.1g)、錐形瓶、研缽(直徑10～12mm)、培養(yǎng)皿(直徑90mm)、量筒、試管及塞子、吸量管(1mL、10mL)、載玻片、蓋玻片、玻璃或搪瓷消毒缸(帶蓋)、大橡皮乳頭、小橡皮乳頭、無菌衣、無菌褲、無菌

8、帽、無菌口罩(也可用一次性物品替代)、接種環(huán)、酒精燈(乙醇燈)、乙醇棉球、滅菌剪刀及鑷子、滅菌稱樣紙及不銹鋼藥勺、試管架、火柴、記號筆、白瓷盤、洗手盆等。玻璃器皿均于160℃干熱滅菌2h或高壓蒸汽滅菌12l℃20min，