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《腸道病原菌的分離與鑒定一ppt課件.ppt》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、腸道病原菌的分離與鑒定一培養(yǎng)基的制備及常用培養(yǎng)基細(xì)菌的培養(yǎng)法EMB培養(yǎng)基的制備腸道病原菌的分離與鑒定（一）血清學(xué)檢測(cè)-肥達(dá)氏反應(yīng)培養(yǎng)基的制備(一)肉湯培養(yǎng)基材料：鮮牛肉、蛋白胨、氯化鈉、pH試紙、10％碳酸氫鈉、試管、三角燒瓶、蒸餾水等。方法1．將新鮮牛肉500g切碎或攪碎，加水1000ml，放4℃冰箱或冷處浸泡過(guò)夜，然后煮沸30min，放涼，使殘余的脂肪凝固，再用絨布或?yàn)V紙過(guò)濾，將濾液補(bǔ)足為原量。2．1000ml肉水中加入蛋白胨10g、氯化鈉5g，加熱溶解。3．用精密pH試紙測(cè)酸堿度，用10％碳酸氫鈉校
2、正pH為7.2左右。過(guò)堿時(shí)，可用10％醋酸校正之。4．分裝于試管中或三角燒瓶中，15磅(121℃)高壓蒸氣滅菌20～30min。高壓蒸汽滅菌器(二)普通瓊脂培養(yǎng)基材料：肉水、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、無(wú)菌平皿、滅菌試管、三角燒瓶等。方法1．按上記數(shù)量把肉水、蛋白胨、氯化鈉和瓊脂放到三角燒瓶中，加熱溶化。2．用pH試紙測(cè)酸堿度，用10％碳酸氫鈉校正pH為7.2左右。3．15磅高壓蒸氣滅菌20～30min。4．趁熱將溶化的培養(yǎng)基倒入滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)平皿倒入約15ml，凝固后即成普通瓊脂平板培養(yǎng)基；如趁熱將培養(yǎng)基倒
3、入滅菌試管內(nèi)，再將試管斜放試驗(yàn)臺(tái)上，凝固后即成普通瓊脂斜面培養(yǎng)基。(三)血液瓊脂培養(yǎng)基有些細(xì)菌其營(yíng)養(yǎng)要求較高，在普通瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)不良，可用血液瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。材料①普通瓊脂培養(yǎng)基②血液(脫纖維羊血或兔血)方法1．加熱溶化普通瓊脂培養(yǎng)基。2．待冷至50℃左右時(shí)，加入無(wú)菌的脫纖維血液，混勻(注意勿使產(chǎn)生泡沫)。3．分注于滅菌試管或平皿中制成血斜面和血平板培養(yǎng)基。E.M.B瓊脂培養(yǎng)基的制備成分蛋白胨10g磷酸氫二鉀2g瓊脂20g乳糖溶液(20％)50ml伊紅溶液(2％)20ml美藍(lán)溶液(0.5％)20m
4、l蒸餾水1000ml制法①將蛋白胨和磷酸氫二鉀加溫溶化于蒸餾水中②校正pH值為7.6加入瓊脂③煮沸溶化過(guò)濾后分裝三角瓶中，每瓶定量分裝④15磅30min高壓滅菌⑤以無(wú)菌操作法按量加入經(jīng)10磅20min高壓滅菌的乳糖、伊紅美蘭液，混勻后傾注平皿備用。E.M.B培養(yǎng)基原理大腸桿菌能分解乳糖產(chǎn)酸，使培養(yǎng)基pH值下降，伊紅與美藍(lán)相結(jié)合成一種復(fù)合物，酸性環(huán)境中，菌體帶正電，易與伊紅結(jié)合，故菌落呈紫黑色或紫紅色，并有金屬光澤。堿性環(huán)境中伊紅與美藍(lán)不結(jié)合，病原菌不分解乳糖，不產(chǎn)酸故菌落為無(wú)色半透明。其次，伊紅、美藍(lán)有抑
5、制革蘭氏陽(yáng)性菌生長(zhǎng)的作用。用途用于分離腸道致病菌，是一種鑒別培養(yǎng)基。并有弱的選擇作用。肥達(dá)氏反應(yīng)肥達(dá)氏反應(yīng)通常用已知的傷寒桿菌“O”、“H”菌液和甲、乙型副傷寒桿菌“H”菌液與病人血清作定量凝集試驗(yàn)(試管法)，以檢測(cè)病人血清中有無(wú)相應(yīng)抗體存在，根據(jù)抗體含量多少及增長(zhǎng)情況用于傷寒、副傷寒病的輔助診斷。材料①待檢可疑傷寒病人血清(1:10稀釋)②診斷菌液：傷寒桿菌“O”(O)傷寒桿菌“H”(OH)甲型副傷寒桿菌“H”(PA)乙型副傷寒桿菌“H”(PB)③生理鹽水④吸管，小試管等。方法本實(shí)驗(yàn)四人一組，每人取6只
6、小試管，排成一列，計(jì)四列為一完整試驗(yàn)。分別標(biāo)明每列管號(hào)和診斷菌液如“O”、“OH”、“PA”、“PB”。按下表先向每管加生理鹽水0.5ml，再加10倍稀釋病人血清0.5ml于第l管，做順序的等倍稀釋，最后加入等量的診斷菌液，充分混勻，置37℃2~4h，再放室溫24小時(shí)后觀察結(jié)果。試管123456生理鹽水（ml）0.50.50.50.50.50.5病理血清10X（ml）0.5↘0.5↘0.5↘0.5↘0.5↘0.5→棄去診斷菌液（ml）0.50.50.50.50.50.5
