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《J-05天然生物材料的提取制藥第三節(jié)多肽和蛋白質(zhì)類藥物的生產(chǎn).doc》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、第五講授課內(nèi)容第二章天然生物材料的提取制藥第三節(jié)多肽與蛋白質(zhì)類藥物的生產(chǎn)2授課時(shí)數(shù)2教學(xué)目標(biāo)掌握多肽類藥物胸腺素和蛋白質(zhì)類藥物胰島素的特性和提取生產(chǎn)方法。教學(xué)重點(diǎn)胸腺素的提取生產(chǎn)工藝教學(xué)難點(diǎn)胸腺素和胰島素的特性教材教具教學(xué)內(nèi)容(含教學(xué)步驟、時(shí)間分配、教法學(xué)法、作業(yè)布置等)復(fù)習(xí)多肽藥物種類,多肽類藥物降鈣素和胸腺激素的功能、結(jié)構(gòu)和生產(chǎn)工藝。導(dǎo)入新課:胸腺素、胰島素分別是多肽和蛋白質(zhì)類藥物的代表,它們?cè)谂R床上都有重要的作用。比如胸腺素具有誘導(dǎo)T細(xì)胞分化,維持機(jī)體的免疫平衡狀態(tài);胰島素能調(diào)節(jié)血糖濃度,治療胰島素依賴性糖尿病。第三節(jié)多肽與蛋白質(zhì)類藥物的生產(chǎn)五、典型多肽和蛋白質(zhì)類藥物
2、的生產(chǎn)實(shí)例(一)提取法生產(chǎn)胸腺素1966年Goldstein等首次報(bào)道從小牛胸腺中提取了部分純化的胸腺素,1972年進(jìn)一步純化分離得到一組具有免疫活性的多肽,稱胸腺素F5(即從小牛胸腺提取得到的第5種組分),并可提供臨床使用。1、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)胸腺素是幾十種多肽組成的混合物,相對(duì)分子量在1萬(wàn)以下;等電點(diǎn)在3.5~9.5;為了便于不同實(shí)驗(yàn)室對(duì)這些多肽的鑒別和比較,根據(jù)它們的等電點(diǎn)以及在等電聚焦分離時(shí)的順序而命名,共分三個(gè)區(qū)域:α區(qū):3.5~5.0三個(gè)區(qū)域β區(qū):5.0~7.0γ區(qū):7.0~9.5胸腺素對(duì)熱穩(wěn)定,短時(shí)間內(nèi)加熱至80℃,其生物活性不降低。2、生產(chǎn)工藝路線小牛胸腺[預(yù)處理
3、]胸腺碎塊[提取]提取液去脂肪和結(jié)締組織,絞碎0.9%NaCl-0.5%辛醇[過(guò)濾]上清液(F1)[除雜蛋白]上清液(F2)[鹽析]上清液(F3)紗布過(guò)濾80℃,冷卻25%硫酸銨[鹽析]沉淀(F4)[除雜]上清液[色譜分離]洗脫液25%硫酸銨溶解,離心SephadexG-150柱[脫鹽]洗脫液[干燥]胸腺肽(F5)SephadexG-25柱冷凍干燥3、工藝過(guò)程a.預(yù)處理:去脂肪,絞碎b.提?。荷睇}水(鹽水溶液),勻漿,離心(組分1)c.除雜蛋白:加熱,60℃,離心(組分2)d.純化:分段鹽析pH=7.0磷酸鹽緩沖液,硫酸銨飽和度0.25,上清液(組分3)調(diào)pH=4.0,硫
4、酸銨飽和度0.5,鹽析物(組分4)除雜0.1Mtris-HCl緩沖液(pH=8.4)溶解,4000×離心30min色譜分離凝膠層析SephadexG-150柱,第3個(gè)峰(葡聚糖凝膠,分離范圍5,000~300,000)脫鹽凝膠層析SephadexG-25柱,第1個(gè)峰(分離范圍1000~5000)e.干燥:冷凍干燥(組分5)4、工藝討論(1)除加熱步驟外,所有步驟應(yīng)在0~4℃下進(jìn)行。(2)組分4過(guò)SephadexG-150柱時(shí),在276nm波長(zhǎng)檢測(cè)共有4個(gè)吸收峰,胸腺素活性位于第3個(gè)峰。進(jìn)一步SephadexG-25柱脫鹽,共有2個(gè)吸收峰,胸腺素活性位于第1個(gè)峰。5、藥理作用
5、與臨床作用促進(jìn)T淋巴細(xì)胞分化成熟。(1)臨床上主要用于治療細(xì)胞免疫缺陷疾病,如胸腺發(fā)育不良、重癥聯(lián)合性免疫缺陷癥、多次感染綜合癥等;(2)腫瘤化療和放療并用胸腺素可使細(xì)胞免疫應(yīng)答增強(qiáng),從而加強(qiáng)化療和放療的抗腫瘤效果。(3)用于治療急性紅斑狼瘡。(二)提取法生產(chǎn)胰島素1、功能和來(lái)源(1)功能調(diào)節(jié)血糖濃度,治療胰島素依賴性糖尿病。1965年,我國(guó)完成了世界上第一個(gè)人工合成蛋白質(zhì)——牛結(jié)晶胰島素的全合成工作。(2)來(lái)源胰臟中胰島β細(xì)胞(α細(xì)胞、β細(xì)胞、γ細(xì)胞)分泌的一種蛋白質(zhì)激素。2、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)(1)結(jié)構(gòu)由A鏈、B鏈通過(guò)2個(gè)二硫鍵連接而成。(2)性質(zhì)①白色或類白色結(jié)晶粉末②相對(duì)分
6、子量:牛5733,豬5764,人5784③胰島素在pH=4.5~6.5范圍內(nèi)幾乎不溶于水④在弱酸性水溶液或混懸在中性緩沖液中較為穩(wěn)定3、生產(chǎn)工藝路線凍胰[提取]胰片[提取]提取液[堿化]堿化液[酸化]刨碎乙酸,草酸氨水pH8~8.4硫酸pH3.6~3.8酸化液[濃縮]濃縮液[去脂]去脂溶液[鹽析]鹽析物減壓蒸發(fā)速熱速冷NaCl,pH2~2.5鹽析物[酸化]濾液[鋅沉淀]沉淀水、丙酮,氨水pH4.2~4.3氨水,乙酸鋅,pH6[堿化][結(jié)晶]結(jié)晶[洗滌][干燥]胰島素精品檸檬酸、乙酸鋅、丙酮,氨水,pH8,過(guò)濾調(diào)pH6水,丙酮、乙醚真空干燥4、工藝過(guò)程方法:酸醇法和鋅沉淀法(
7、1)提?。核岽挤ǎ?)堿化、酸化:除堿性蛋白、酸性蛋白(3)濃縮:30℃以下,減壓濃縮(4)去脂、鹽析(5)酸化、鋅沉淀:除酸性蛋白(6)堿化、鋅沉淀:除堿性蛋白(7)洗滌、干燥六、多肽和蛋白質(zhì)含量測(cè)定(一)多肽、蛋白質(zhì)含量測(cè)定1、凱氏定氮法2、紫外分光光度法3、福林-酚試劑法(二)純度的檢定1、電泳均一性測(cè)定2、高速離心法3、可結(jié)晶性4、蛋白質(zhì)功能及免疫抗原性測(cè)定小結(jié):本次課須掌握多肽類藥物胸腺素和蛋白質(zhì)類藥物胰島素的特性和提取生產(chǎn)方法。思考題:1、簡(jiǎn)述水解提取法生產(chǎn)胸腺素和胰島素的生產(chǎn)工藝路線?課后體會(huì):