熒光定量PCR試劑盒.doc

《熒光定量PCR試劑盒.doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。

1、熒光定量PCR試劑盒?FastSYBRMixture（WithROX）Cat.No.WD3122保存：-20℃避光(如需頻繁使用，2-8℃保存，盡量避免反復(fù)凍融。)組分說明Cat.No.KitSize2×FastSYBRMixture（WithROX）RNase-FreeWaterWD312650μl反應(yīng)×200次（5ml）5×1ml5ml產(chǎn)品簡介FastSYBRMixture(WithROX)是專用于染料法(SYBRGreenⅠ)實時熒光定量PCR的預(yù)混體系，濃度為2×,包含F(xiàn)astTaqDNAPolymerase、PCRBuffer、dNTPs、SYBRGreenI熒光染

2、料、Mg2+和ROX(內(nèi)參）校正染料，操作簡單方便。主要用于基因組DNA靶序列和RNA反轉(zhuǎn)錄后的cDNA靶序列檢測。本品所含熒光染料SYBRGreenI可以與所有的雙鏈DNA相結(jié)合，使該產(chǎn)品可用于不同靶序列的檢測而不需合成特異性標(biāo)記探針。本品含有的FastTaqDNAPolymerase，能有效減少在常溫條件下由引物和模板非特異性結(jié)合或引物二聚體而產(chǎn)生的非特異性擴增，酶的激活僅需在95℃孵育20s。整個PCR反應(yīng)過程比普通反應(yīng)可節(jié)省約40分鐘，大大縮短了PCR的反應(yīng)時間。獨特的PCR緩沖體系與熱啟動酶的組合，有效抑制了非特異產(chǎn)物的產(chǎn)生，并顯著提高PCR的擴增效率。該產(chǎn)品適用范

3、圍廣，可用于普通和快速定量PCR程序。所含的ROX染料可校正定量PCR儀孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號誤差,適用于以ROX作為校正染料的所有熒光定量PCR儀。注意事項1使用前請上下顛倒輕輕混勻，盡量避免起泡，并經(jīng)短暫離心后使用。2本產(chǎn)品中含有熒光染料SYBRGreenI和ROX，保存本產(chǎn)品或配制PCR反應(yīng)液時應(yīng)避免強光照射。3避免反復(fù)凍融本品，反復(fù)凍融可能使產(chǎn)品性能下降。本產(chǎn)品長期保存可置于-20℃，避光。如果在短期內(nèi)需要頻繁使用，可在2-8℃保存。4本品不能用于探針法熒光定量PCR。使用方法以下舉例為常規(guī)的反應(yīng)體系和反應(yīng)條件，實際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小的不同進(jìn)行

4、相應(yīng)的改進(jìn)和優(yōu)化。1.PCR反應(yīng)體系：注意：1）通常引物濃度以0.2μM可以得到較好結(jié)果，可以在0.1-1.0μM作為設(shè)定范圍的參考。擴增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系。2）通常DNA模板的量以10-100ng基因組DNA或1-10ngcDNA為參照，因不同物種的模板中含有的目的基因拷貝數(shù)不同，可對模板進(jìn)行梯度稀釋，以確定最佳的模板使用量。2.PCR反應(yīng)程序：兩步法PCR：注意：1）本產(chǎn)品所采用的酶須在預(yù)變性95℃、20s條件下實現(xiàn)酶的活化。在此條件下，大多數(shù)模板可良好的進(jìn)行解鏈。對GC含量高、二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜的模板，可將

5、預(yù)變性時間延長至1分鐘，以使起始模板充分解鏈。若高溫處理時間過長，會對酶的活性造成影響?？筛鶕?jù)模板情況確定最佳的預(yù)變性時間。2）建議采用兩步法PCR反應(yīng)程序，若因使用Tm值較低的引物等原因，得不到良好的實驗結(jié)果時，可嘗試進(jìn)行三步法PCR擴增，退火溫度請以56℃-64℃的范圍作為設(shè)定參考。3）融解曲線分析請以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進(jìn)行設(shè)定，本說明是以ABI7500熒光定量PCR儀為參照設(shè)定。