植物組培作業(yè).doc

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1、姓名：宋亞飛學(xué)號：專業(yè)：養(yǎng)殖（專碩）1通常植物組織培養(yǎng)所用培養(yǎng)基構(gòu)成要素包括哪些？2植物組織培養(yǎng)中常用的消毒劑，請列舉4個以上。3植物組織培養(yǎng)一般需要注意哪些培養(yǎng)條件。1答：1.無機營養(yǎng)物無機營養(yǎng)物主要由大量元素和微量元素兩部分組成大量元素主要包括氮、磷、鉀、鈣、鎂和硫六種氮源通常有硝態(tài)氮或銨態(tài)氮但在培養(yǎng)基中用硝態(tài)氮的較多也有將硝態(tài)氮和銨態(tài)氮混合使用的。磷和硫則常用磷酸鹽和硫酸鹽來提供。鉀是培養(yǎng)基中主要的陽離子在近代的培養(yǎng)基中其數(shù)量有逐漸提高的趨勢。而鈣、鈉、鎂的需要則較少。培養(yǎng)基所需的鈉和氯化物

2、由鈣鹽、磷酸鹽或微量營養(yǎng)物提供。微量元素包括碘、錳、鋅、鉬、銅、鈷和鐵?這些元素有的對生命活動的某個過程十分有用有的對蛋白質(zhì)或酶的生物活性十分重要有的是參與某些生物過程的調(diào)節(jié)。培養(yǎng)基中的鐵離子大多以螯合鐵的形式存在即FeSO4與Na2—EDTA螯合劑的混合。?2.碳源培養(yǎng)的植物組織或細胞它們的光合作用較弱。因此需要在培養(yǎng)基中附加一些碳水化合物以供需要。培養(yǎng)基中的碳水化合物通常是蔗糖或D-葡萄糖用量通常為2-4高者可達5亦可用市售的白糖所代替但一般應(yīng)增加用量而且最好用比較固定的廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品以保證實

3、驗的穩(wěn)定性。?3.有機營養(yǎng)成分包括人工合成或天然的有機附加物包括維生素氨基酸及其它有機物質(zhì)等。最常用的有酪朊水解物水解乳蛋白、水解酪蛋白CH、酵母提取物、玉米胚乳、麥芽浸出物、西紅柿汁、椰子汁CM及各種氨基酸如甘氨酸氨基乙酸等。維生素在培養(yǎng)基中加入維生素常有利于外植體的發(fā)育。培養(yǎng)基中的維生素屬于B族維生素其中效果最佳的有硫氨素組織培養(yǎng)中使用的赤霉素只有一種即赤霉酸GA3。雖然已經(jīng)用于頂端分生組織的培養(yǎng)和維管分化的研究但在培養(yǎng)基中很少添加因為它的作用往往是負面的。乙烯等。?5.瓊脂或其他支持物?除液

4、體懸浮培養(yǎng)外就目前情況而言瓊脂是一種極為理想的支持物。一般濃度0.4-1質(zhì)量越差的瓊脂用量越大。瓊脂作為培養(yǎng)基的支持物使培養(yǎng)基呈固體狀態(tài)以利于各種外植體的培養(yǎng)。?6.其他添加劑含天然提取物、抗生素等?活性炭?滲透調(diào)節(jié)劑?抗生素?抗氧化劑等。?活性炭加入培養(yǎng)基中的目的主要是利用其吸附能力減少一些有害物質(zhì)的影響例如防止酚類物質(zhì)污染而引起組織褐化死亡。這在蘭花組織培養(yǎng)中效果更明顯。另外活性炭使培養(yǎng)基變黑有利于某些植物生根。但活性炭對物質(zhì)吸附無選擇性既吸附有害物質(zhì)也吸附有利物質(zhì)因此使用時應(yīng)慎重考慮不能過量

5、一般用量為1—5?；钚蕴繉π螒B(tài)發(fā)生和器官形成有良好的效應(yīng)。在失去胚狀體發(fā)生能力的胡蘿卜懸浮培養(yǎng)細胞中加入1一4活性炭可使胚狀體的發(fā)生能力得以恢復(fù)。?7.水?水是植物原生質(zhì)體的組成成分也是一切代謝過程的介質(zhì)和溶媒。配制培養(yǎng)基母液時要用蒸餾水以保持母液及培養(yǎng)基成分的精確性防止儲藏過程發(fā)霉變質(zhì)。大規(guī)模生產(chǎn)時可用自來水。但在少量研究上盡量用蒸餾水以防成分的變化引起不良效果。?8.pH?培養(yǎng)基的pH因培養(yǎng)材料不同而異大多數(shù)植物都要求在pH5.6—5.8的條件下進行組織培養(yǎng)。常用0.1mol/L的Na0H和0

6、.1mol/L的HCl來調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的PH。2答：外植體在接種之前,?須經(jīng)嚴格地滅菌.由于滅菌劑的種類不同,?殺菌力不同,?因此選擇消毒劑,?既要考慮具有良好的消毒殺菌作用,?同時又易被蒸餾水沖洗掉或能自行分解的物質(zhì),?且不會損傷或只輕微損傷組織材料而不影響生長.在使用不同的藥劑時,?需要考慮使用濃度和處理時間.現(xiàn)將常用的消毒劑列于下表?中.??????????????????????????????常用消毒劑其中70%～75%酒精具有較強的殺菌力、穿透力和濕潤作用,可排除材料上的空氣,利于其他消毒

7、劑的滲入,?因此常與其他消毒劑配合使用.由于酒精穿透力強,應(yīng)嚴格掌握好處理時間,時間太長會引起處理材料的損傷.????選擇適宜的消毒劑處理時,為使其消毒效果更徹底,有時還需與黏著劑或潤濕劑配合使用,使消毒劑能更好地滲入外植體內(nèi)部,達到理想的消毒效果3答：1、培養(yǎng)材料的選擇，需要選擇生長較好的材料2、植物材料的滅菌，要根據(jù)不同的材料來確定，材料允許的話，可以設(shè)計實驗取得最佳的滅菌處理3、培養(yǎng)基的配置。要根據(jù)不同的材料，不同的物種，選擇合適的培養(yǎng)基，最好有一組實驗取得。做培養(yǎng)基的過程中注意調(diào)劑培養(yǎng)基的

8、PH值，有些高溫分解的激素要過濾滅菌等。4、培養(yǎng)條件的選擇，包括光照、溫度、濕度等。5、接種。注意滅菌，最好有超凈工作臺。?植物組培技術(shù)作為生物技術(shù)在農(nóng)林領(lǐng)域的應(yīng)用，越來越顯示出其獨特優(yōu)勢，各地陸續(xù)建起了各類組培室，而且更多的人想進入，下面就組培培養(yǎng)過程中所需要的條件進行簡單介紹：??一、溫度：??對大多數(shù)植物組織20～28℃即可滿足生長所需，其中26～27℃最適合。??二、光：??組織培養(yǎng)通常在散射光線下進行。光的影響可導(dǎo)致不同的結(jié)果，有些植物組織在暗處生長較好，而另一些植物組織