蔬菜中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的快速檢測.docx

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1、蔬菜中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的快速檢測（黃寬，2015級食品質(zhì)量與安全專業(yè)）【內(nèi)容摘要】有機(jī)磷農(nóng)藥作為一類高效、廣譜的殺蟲劑被廣泛地用于農(nóng)業(yè)、家庭以及倉儲等的殺蟲，能有效地控制害蟲、雜草及細(xì)菌的生長，提高農(nóng)業(yè)產(chǎn)量。但農(nóng)藥中有些物質(zhì)在一定環(huán)境條件下能長時(shí)間保持其毒活性，若長時(shí)間攝取殘留農(nóng)藥則會影響人類的健康。殘留農(nóng)藥在人體內(nèi)不斷累積，能引起各種嚴(yán)重疾病。因此，研制出簡便、快速及準(zhǔn)確地檢測有機(jī)磷農(nóng)藥殘留對于保護(hù)環(huán)境安全與人體健康具有非常重要的意義?！娟P(guān)鍵詞】有機(jī)磷農(nóng)藥，酶抑制法，快速檢測一、有機(jī)磷農(nóng)藥1.1有機(jī)磷

2、農(nóng)藥的特點(diǎn)有機(jī)磷殺蟲劑是我國使傭最廣泛、傭量最大的一類殺蟲劑，其品種繁多，性能也千差萬別，但綜合來起來看有如下特點(diǎn)：(1)殺蟲譜較寬。目前常傭有的機(jī)磷殺蟲劑品種可以防治多種農(nóng)林害蟲，有些可傭與防治與衛(wèi)生害蟲及家畜、禽體外寄生蟲。(2)殺蟲方式多樣化，可滿意多方面需要。大多數(shù)品種具有觸殺和胃毒作傭，有些品種具有內(nèi)只作傭或滲透作傭，個(gè)別品種具有熏蒸作傭，可進(jìn)行多種方式施藥，防治地上、地下、鉆蛀、刺吸式等不同類型的農(nóng)林害蟲。（3）在自然環(huán)境和動(dòng)植物體內(nèi)易降解.正確使用時(shí)殘留問題小,不致污染環(huán)境且在高等動(dòng)物體

3、內(nèi)無累積毒性。1.2有機(jī)磷農(nóng)藥的毒性有機(jī)磷農(nóng)藥可經(jīng)消化道、呼吸道及完整的皮膚和粘膜進(jìn)入人體。職業(yè)性農(nóng)藥中毒主要由皮膚污染引起。吸收的有機(jī)磷農(nóng)藥在體內(nèi)分布于各器官，其中以肝臟含量最大，腦內(nèi)含量則取決于農(nóng)藥穿透血腦屏障的能力。有機(jī)磷農(nóng)藥中毒的主要機(jī)理是抑制膽堿酯酶的活性。有機(jī)磷與膽堿酯酶結(jié)合，形成磷?；憠A酯酶，使膽堿酯酶失去催化乙酰膽堿水解作用，導(dǎo)致組織中能使神經(jīng)過度興奮的乙酰膽堿過量蓄積。這種乙酰膽堿傳導(dǎo)介質(zhì)代謝紊亂,可導(dǎo)致遲發(fā)性神經(jīng)毒性,引起昏迷等性狀。二、酶抑制法2.1酶抑制法的原理酶抑制法測定有

4、機(jī)磷農(nóng)藥殘留是根據(jù)有機(jī)磷農(nóng)藥的毒性對酶分解底物的抑制作用進(jìn)行的，其酶源有來自動(dòng)物的膽堿酯酶和從植物中提取的植物酯酶。動(dòng)物膽堿酯酶法是基于有機(jī)磷農(nóng)藥的毒性抑制乙酰膽堿酯酶催化底物水解生成乙酸和膽堿,后者與5,5-二硫代-雙-2-硝基苯甲酸反應(yīng),生成黃色產(chǎn)物5-硫代-2-硝基苯甲酸,其在410nm處有最大吸收,測定其在單位時(shí)間內(nèi)的生成量，即可測得乙酰膽堿酯酶的活性。植物酯酶可以催化乙酸萘酯水解為萘酚和乙酸，萘酚與顯色劑固藍(lán)B作用形成紫紅色的偶氮化合物,從而發(fā)生顯色反應(yīng)。2.2動(dòng)物膽堿酯酶法自從1951年發(fā)

5、現(xiàn)有機(jī)磷農(nóng)藥在體外也能抑制膽堿酯酶以來,絕大多數(shù)研究都是基于動(dòng)物膽堿酯酶這一原理進(jìn)行的。目前，膽堿酯酶法檢測有機(jī)磷的方法主要有酶片法、酶抑制分光光度法以及膽堿酯酶生物傳感器法。（1）酶片法酶片法是將敏感生物的膽堿酯酶和生色基質(zhì)液經(jīng)固化處理后加載到濾紙片或類似載體物質(zhì)上，基質(zhì)在膽堿酯酶的催化作用下迅速分解，生成膽堿(藍(lán)色)和乙酸.有機(jī)磷和氨基甲酸酯農(nóng)藥對膽堿酯酶有抑制作用,使催化、水解、變色的過程發(fā)生改變。若膽堿酯酶受到抑制,基質(zhì)就不能水解、不變色,表明樣品中含有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥(呈陽性)。目前廣

6、泛使用的速測箱、速測卡法均屬于酶片法。近年來國內(nèi)常見的用固化含有膽堿酯酶和靛酚乙酸酯試劑的試紙片建立的適合我國蔬菜中部分農(nóng)藥殘留限量的現(xiàn)場監(jiān)督檢測的速測卡法,其檢出限一般在0.3～3.5mg/kg,檢出時(shí)間為15min操作簡單,速度快,測試成本低廉[。也有學(xué)者利用馬血清中的乙酰膽堿酯酶與底物氯化乙酰膽堿作用,根據(jù)反應(yīng)前后的pH值變化及指示劑的顏色變化情況,建立的一種可以作定性及半定量分析的酶片快速檢測法,應(yīng)用于實(shí)際檢測黃瓜中農(nóng)殘的效果較好。（2）酶抑制分光光度法有機(jī)磷類農(nóng)藥對乙酰膽堿酯酶活性有抑制作用

7、,濃度越高,抑制率越高。通過分光光度計(jì)測定吸光度隨時(shí)間的變化值,并與空白對照比較求得酶抑制率,從而判定樣品中是否有有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。該法所需儀器設(shè)備簡單、靈敏度高、前處理簡單、檢測時(shí)間短,可及時(shí)檢測含農(nóng)殘的蔬菜。曾有報(bào)道以雞腦為酶源提取乙酰膽堿酯酶，利用酶抑制分光光度法檢測油白菜中有機(jī)磷農(nóng)藥(對硫磷、辛硫磷、氧化樂果)的殘留量，可使3種農(nóng)藥的回收率分別達(dá)到97%,、101%和99%.IngridWalt等從鐮刀菌pisi中提取角質(zhì)酶，利用酶抑制分光光度法和96孔板法同時(shí)檢測多個(gè)樣品中有機(jī)

8、磷和氨基甲酸酯類殺蟲劑的含量，該法對毒死蜱和對氧磷的檢測限分別為2.6mg/L和0.04mg/L。2.3.3膽堿酯酶生物傳感器膽堿酯酶生物傳感器法是目前農(nóng)藥殘留速測技術(shù)中的研究熱點(diǎn),其在研究方法多樣化、靈敏度、準(zhǔn)確性、響應(yīng)時(shí)間等方面都具有很大優(yōu)勢。(1)電化學(xué)型：電化學(xué)型生物傳感器是基于膽堿酯酶催化底物水解生成電活性物質(zhì)的反應(yīng)而構(gòu)建。通常采用電化學(xué)氧化法直接測定生成的巰基膽堿或者先用膽堿氧化酶氧化生成的膽堿，進(jìn)一步用電化學(xué)方法測量在此催化氧化過程中消耗的