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1、運(yùn)用差異蛋白組研究蟲草益腎方對單側(cè)輸尿管梗阻大鼠腎組織的影響目的：通過建立單側(cè)輸尿管梗阻大鼠模型,研究蟲草益腎方對腎間質(zhì)纖維化大鼠腎功能和組織形態(tài)學(xué)的影響,并利用蛋白質(zhì)組學(xué)方法探討腎間質(zhì)纖維化機(jī)制以及蟲草益腎方抗腎間質(zhì)纖維化的作用靶點(diǎn)。方法：將200只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、模型組、蟲草益腎方組和福辛普利組五組各40只。采用單側(cè)輸尿管梗阻的方法建立腎間質(zhì)纖維化模型,術(shù)后第一天開始給藥,蟲草益腎方組予蟲草益腎方水煎液灌胃,福辛普利組予福辛普利鈉水溶液灌胃,正常組、假手術(shù)組、模型組予等量蒸餾水灌胃,
2、每日一次。在給藥后的第6、13、20、27天隨機(jī)選擇各組10只大鼠置于代謝籠中(禁食,不禁水)24小時,收集全部尿液,計算尿量,用于24h尿蛋白含量測定；24小時后處死大鼠收集血清,用于肌酐、尿素氮等生化指標(biāo)測定；收集腎組織一部分用于腎臟病理檢測(HE、Masson染色),一部分用于蛋白質(zhì)組學(xué)iTRAQ檢測,一部分用于westernblot檢測蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定出的差異蛋白。結(jié)果：1.蟲草益腎方可顯著改善UUO大鼠一般狀態(tài),與模型組比較可增加體重和尿量(P<0.05)。2.生化檢測結(jié)果顯示：造模后模型組大鼠24小時
3、尿蛋白定量、血清肌酐、尿素氮水平上升,蟲草益腎方組可降低24小時尿蛋白定量、血清肌酐、尿素氮水平(P<0.05)。3.HE和Masson染色結(jié)果顯示：蟲草益腎方可改善UUO大鼠腎組織病理改變,與模型組比較可減少纖維化面積百分比(P<0.05)。4.通過蛋白質(zhì)組學(xué)共鑒定出模型組、正常組6793個蛋白,其中差異蛋白1862個,模型組上調(diào)蛋白875個,下調(diào)蛋白987個。5.通過生物信息學(xué)對差異蛋白分析,差異蛋白涉及多個生物過程如細(xì)胞過程、代謝過程、生物調(diào)控、應(yīng)激反應(yīng)、信號、免疫系統(tǒng)過程、生物附著、生長等。并提取
4、出315條相關(guān)信號／代謝通路如PI3K-Akt、PPAR、MAPK、HIF-1、TNF-α、Toll樣受體、VEGF、Wnt、Notch、TGF-β、Jak-STAT等。6.westernblot結(jié)果顯示：與模型組比較,蟲草益腎方組腎組織Wnt4、β-catenin表達(dá)降低(P<0.05)。結(jié)論：1.蟲草益腎方可改善大鼠一般狀態(tài),增加UUO大鼠體重、尿量。2.蟲草益腎方可減少UUO大鼠尿蛋白,降低血清肌酐、尿素氮水平,改善腎臟功能。3.蟲草益腎方可減輕UUO大鼠腎臟病理改變。4.UUO大鼠腎間質(zhì)纖維化的機(jī)制與多
5、個細(xì)胞因子、多條信號通路、多個生物過程有關(guān)。5.蟲草益腎方延緩腎間質(zhì)纖維化的作用可能是通過抑制Wnt/β-catenin信號通路實(shí)現(xiàn)的。
