國家標(biāo)準(zhǔn)：gb 1886.257-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑 溶菌酶

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1、中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB1886.257—2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑溶菌酶2016-08-31發(fā)布2017-01-01實(shí)施中華人民共和國發(fā)布國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)GB1886.257—2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑溶菌酶1范圍本標(biāo)準(zhǔn)適用于以雞蛋清為原料,經(jīng)提取、精制等工藝制得的食品添加劑溶菌酶。2技術(shù)要求2.1感官要求感官要求應(yīng)符合表1的規(guī)定。表1感官要求要求項(xiàng)目檢驗(yàn)方法固體液體色澤白色至淡黃色淺黃色至深褐色將適量試樣均勻置于燒杯或白瓷盤內(nèi),于自然狀態(tài)粉末液體光線下觀察其色澤和狀態(tài)2.2理化指標(biāo)理化指標(biāo)應(yīng)符合表2的規(guī)定。表2

2、理化指標(biāo)指標(biāo)項(xiàng)目檢驗(yàn)方法固體液體酶活力/[U/mg(mL)]符合標(biāo)示值附錄A中A.2水分,w/%≤6—GB5009.3灰分,w/%≤1.50.3GB5009.4pH3.0~7.0附錄A中A.3鉛(Pb)/(mg/kg)≤2.0GB5009.12總砷(以As計(jì))/(mg/kg)≤1.0GB5009.112.3微生物指標(biāo)微生物指標(biāo)應(yīng)符合表3的規(guī)定。1GB1886.257—2016表3微生物指標(biāo)項(xiàng)目指標(biāo)檢驗(yàn)方法菌落總數(shù)/[CFU/g(mL)]≤50000GB4789.2霉菌和酵母/[CFU/g(mL)]≤100GB4789.15大腸埃希氏菌/[M

3、PN/g(mL)]<3.0GB4789.38沙門氏菌/25g(mL)不得檢出GB4789.4金黃色葡萄球菌/25g(mL)不得檢出GB4789.10定性檢驗(yàn)2GB1886.257—2016附錄A檢驗(yàn)方法A.1一般規(guī)定本標(biāo)準(zhǔn)除另有規(guī)定外,所用試劑的純度應(yīng)在分析純以上,所用標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液、雜質(zhì)測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)溶液、制劑及制品,應(yīng)按GB/T601、GB/T602、GB/T603的規(guī)定制備,實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T6682中三級(jí)水的規(guī)定。試驗(yàn)中所用溶液在未注明用何種溶劑配制時(shí),均指水溶液。A.2酶活力的測(cè)定A.2.1方法原理溶菌酶可水解細(xì)菌的細(xì)胞壁,造成藤黃

4、微球菌的溶解而引起溶液吸光度值的降低。一個(gè)溶菌酶活力單位定義為25℃,pH6.2條件下,使用藤黃微球菌懸濁液在450nm處每分鐘引起吸光度變化為0.001所需溶菌酶的量。A.2.2試劑和材料A.2.2.1藤黃微球菌:ATCC4698或CICC10680。A.2.2.20.1mol/L磷酸鹽緩沖液:pH6.2。稱取11.70g磷酸二氫鈉(NaH2PO4·2H2O)、7.86g磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)及0.372g乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)于無菌水中并稀釋定容至1000mL。調(diào)整緩沖溶液pH至6.2±0.1。注:用小份

5、緩沖溶液檢查pH,以避免緩沖溶液被污染。如果需要,通過加入更多的磷酸二氫鈉溶液或磷酸氫二鈉溶液調(diào)整pH。A.2.2.3溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)品:蛋清溶菌酶。A.2.2.4底物溶液:用磷酸鹽緩沖液制備50mL藤黃微球菌懸濁液。使用前,底物于37℃培養(yǎng)30min。該底物溶液室溫下可穩(wěn)定2h。以磷酸鹽緩沖液調(diào)分光光度計(jì)零點(diǎn),然后測(cè)定底物溶液的吸光度,450nm下讀數(shù)應(yīng)為0.70±0.1。A.2.3儀器和設(shè)備A.2.3.1分光光度計(jì):精度±0.001。A.2.3.2pH計(jì)。注:所用的器皿應(yīng)保持無菌,保證工作環(huán)境的清潔。A.2.4分析步驟A.2.4.1試樣溶液的

6、制備準(zhǔn)確稱取100mg±0.1mg試樣,置于50mL容量瓶中,用約25mL磷酸鹽緩沖液攪拌溶解并稀釋定容,充分混勻。再轉(zhuǎn)移3mL上述試樣制備溶液至100mL容量瓶中,用磷酸鹽緩沖液攪拌溶解并稀釋定容。3GB1886.257—2016A.2.4.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精確稱取50mg蛋清溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)品于50mL容量瓶中,用約25mL磷酸鹽緩沖液攪拌溶解并稀釋定容,充分混勻(如果需要,冷凍該溶液以備后續(xù)測(cè)定)。轉(zhuǎn)移3mL上述標(biāo)準(zhǔn)制備溶液至100mL容量瓶中,用磷酸鹽緩沖液攪拌溶解并稀釋定容。A.2.4.3測(cè)定取3份標(biāo)準(zhǔn)溶液和3份試樣溶液進(jìn)行測(cè)定。25℃

7、室溫下,將1cm比色皿放入分光光度計(jì),用磷酸鹽緩沖液調(diào)整吸光度零點(diǎn)。吸2.9mL底物溶液于比色皿,最初450nm處吸光度應(yīng)為0.70±0.10,3min之內(nèi)初始吸光度值變化應(yīng)小于或等于0.003時(shí),方可開始測(cè)定。吸取0.1mL標(biāo)準(zhǔn)溶液加入底物溶液,充分混合。記錄3min吸光度值的變化,每15s記錄一次吸光度值。每分鐘吸光度值變化應(yīng)在0.03~0.08,若不在要求范圍需調(diào)整試樣溶液的濃度。重復(fù)操作測(cè)定試樣溶液。反應(yīng)1min后穩(wěn)定,計(jì)算時(shí)忽略最初1min的讀數(shù)。A.2.4.4結(jié)果計(jì)算酶活力X,按式(A.1)計(jì)算:(A)1-A2X=…………………

8、…………(A.1)2×m×0.001式中:A1———試樣在450nm處反應(yīng)1min時(shí)的吸光度;A2———試樣在450nm處反應(yīng)3min時(shí)的吸光度;m———用于分析的試樣制備溶液中