生化檢驗(yàn)(肝功)ppt課件

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肝功能常規(guī)生化檢驗(yàn)1

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2主要內(nèi)容肝功檢測(cè)項(xiàng)目:(肝十二項(xiàng))AST（谷草轉(zhuǎn)氨酶）、ALT（谷丙轉(zhuǎn)氨酶）D-BIL（直接膽紅素）、T-BIL（總膽紅素）TP（總蛋白）、ALB（白蛋白）、GLOB（球蛋白）ALP（堿性磷酸酶）GGT（γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶）CHE（膽堿酯酶）TBA（總膽汁酸）PALB（前白蛋白）3

3肝功能檢測(cè)肝臟的基本功能肝臟的代謝功能肝臟的生物轉(zhuǎn)化功能肝臟的分泌與排泄功能4

4肝臟的代謝功能接受來(lái)自消化道的各種物質(zhì)合成除γ-球蛋白以外幾乎所有的血漿蛋白合成膽汁酸加工和處理體內(nèi)產(chǎn)生或外界進(jìn)入的非營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)肝臟是多種激素在發(fā)揮調(diào)節(jié)作用后降解的主要部位5

5肝臟的生物轉(zhuǎn)化功能某些生物活性物質(zhì)代謝終產(chǎn)物外界異物氧化、還原水解剩余物質(zhì)結(jié)合葡萄糖醛酸硫酸氨基酸增加溶解度排出體外甲基化乙?；懦鲶w外排出體外6

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8血清轉(zhuǎn)氨酶的測(cè)定ALT（谷丙轉(zhuǎn)氨酶）各器官中按含量多少依次為：肝臟、腎臟、心臟、骨骼肌等。在肝細(xì)胞中主要存在于細(xì)胞質(zhì)中，只有少量在線粒體中，肝細(xì)胞中ALT活性比血清高2850倍。AST（谷草轉(zhuǎn)氨酶）各器官中按含量多少依次為：心臟、肝臟、骨骼肌、腎臟等。在肝細(xì)胞中約80%存在于線粒體中，約20%存在于胞質(zhì)中，血清中AST和ALT的活性比值約為1.15參考值A(chǔ)ST<37U/L(37℃)(酶速率法)ALT<42U/L(37℃)(酶速率法)AST/ALT1.15左右9

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11谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)檢測(cè)原理ALT+L-丙氨酸+α-酮戊二酸丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+NADHL-乳酸+NAD+在340nm處檢測(cè)NADH的吸收峰來(lái)推算血清中ALT的濃度LDH12

12谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）檢測(cè)原理AST+天門(mén)冬氨酸+α-酮戊二酸草酰乙酸+L-谷氨酸草酰乙酸+NADHL-蘋(píng)果酸+NAD+在340nm處檢測(cè)NADH的吸收峰來(lái)推算血清中AST的濃度MDH13

13臨床意義1、急性病毒性肝炎ALT、AST均升高，急性肝炎早期，AST/ALT<1重癥肝炎臨終期會(huì)出現(xiàn)“酶膽分離”現(xiàn)象，即血中ALT濃度下降，甚至在正常范圍內(nèi)，而此時(shí)膽紅素卻進(jìn)行性增高14

142、慢性肝炎和脂肪肝AST、ALT輕度上升，一般不超過(guò)參考值的3倍，有時(shí)可降至正常但是慢性活動(dòng)性肝炎，ALT多數(shù)升至參考值的3~5倍，且長(zhǎng)期維持在一個(gè)較高的水平，如果伴有肝壞死，可升至參考值的10倍以上。脂肪肝時(shí)，ALT可持續(xù)輕度升高并伴有高脂血癥15

153、肝硬化取決于肝細(xì)胞壞死和肝纖維化程度肝硬化病變累及線粒體時(shí)，多數(shù)AST升高程度可超過(guò)ALT（肝細(xì)胞中，AST80%存在于線粒體中）4、原發(fā)性肝癌ALT可輕度升高或正常，提示可能并發(fā)肝壞死，預(yù)后嚴(yán)重5、其他疾病AST升高如急性心肌梗死、右心功能不全、肌營(yíng)養(yǎng)不良、潰瘍性結(jié)腸炎、外傷等16

16附注：正常新生兒ALT水平比成年人約高2倍，出生后約3個(gè)月降至成年人的水平。新生兒的肝細(xì)胞膜通透性較大，ALT從肝細(xì)胞滲入血漿較多，使血清ALT水平升高。血清不宜反復(fù)凍融，以免影響酶活性。血清置4℃1周，酶活性無(wú)顯著變化。在常規(guī)ALT測(cè)定中，不推薦冰凍保存血清標(biāo)本。宜用血清標(biāo)本測(cè)定。草酸鹽、肝素、枸櫞酸鹽雖不抑制酶活性，但可引起反應(yīng)液輕度混濁。紅細(xì)胞內(nèi)ALT含量為血清中3~5倍，應(yīng)避免標(biāo)本溶血。17

17血清膽紅素的測(cè)定黃疸血清中膽紅素含量過(guò)高，則可擴(kuò)散至組織中，組織被黃染。分類溶血性肝細(xì)胞性膽汁淤積性18

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22直接膽紅素血清與重氮試劑混合后，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)所測(cè)定的膽紅素相當(dāng)于直接膽紅素含量，總膽紅素減去直接膽紅素即為間接膽紅素參考值：直接膽紅素0~6.8μmol/L間接膽紅素1.7~13.2μmol/L23

23總膽紅素測(cè)定原理：血清膽紅素+重氮試劑偶氮膽紅素出現(xiàn)呈色反應(yīng)，顏色深淺與膽紅素含量成正比參考值：3.4~20.5μmol/L甲醇、咖啡因加速劑24

24臨床意義:總膽紅素㈠判斷有無(wú)黃疸㈡根據(jù)血清膽紅素的分類，判斷黃疸類型直接膽紅素㈠當(dāng)總膽紅素水平升高時(shí)，D-BIL/T-BIL可來(lái)協(xié)助鑒別黃疸肝細(xì)胞黃疸D-BIL/T-BIL常為40%~60%梗阻性黃疸D-BIL/T-BIL常>60%25

25附注：應(yīng)空腹采血，避免脂血引起反應(yīng)液渾濁，輕度溶血對(duì)本法無(wú)影響，但是明顯溶血可使測(cè)定結(jié)果偏低。血液標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)液應(yīng)避免陽(yáng)光直照，防止膽紅素的光氧化。膽紅素對(duì)光的敏感度與溫度有關(guān)，血標(biāo)本應(yīng)避光置冰箱保存。標(biāo)本保存冰箱可穩(wěn)定3天，-70℃暗處保存可穩(wěn)定3個(gè)月。26

26總蛋白（TP）測(cè)定是血清所含各種蛋白質(zhì)的總和可一定程度反映肝臟合成和儲(chǔ)備功能測(cè)定方法：（推薦）雙縮脲比色法蛋白質(zhì)中的肽鍵在堿性條件下與Cu2+作用生成藍(lán)紫色的化合物。27

27測(cè)定原理：在堿性條件下，蛋白質(zhì)多肽鏈中的肽鍵與銅離子（Cu2+）絡(luò)合形成紫紅色化合物參考值;60~80g/L28

28臨床意義：生理性波動(dòng)：由于體液分布原因，長(zhǎng)久臥床者比直立活動(dòng)時(shí)約低4~5g/L；新生兒比成人低5~8g/L；60歲以上的老年人比成人低2g/L增高：①血液濃縮:導(dǎo)致TP相對(duì)增高：如嚴(yán)重腹瀉、嘔吐、高熱時(shí)急劇失水、休克、慢性腎上腺皮質(zhì)功能減退②血漿蛋白質(zhì)合成增加：主要見(jiàn)于球蛋白合成增加、多發(fā)性骨髓瘤患者29

29減低：①血液稀釋:導(dǎo)致TP濃度相對(duì)減低：靜脈注射過(guò)多低滲溶液或各種原因引起的水、鈉潴留②攝入不足或消耗增加：如食物中長(zhǎng)期缺乏蛋白質(zhì)、長(zhǎng)期消化不良或某些消耗性疾?。ńY(jié)核、甲亢、惡性腫瘤等）③蛋白質(zhì)丟失：嚴(yán)重?zé)齻ㄑ獫{大量丟失）、大量失血、腎病綜合癥時(shí)大量蛋白尿或潰瘍性結(jié)腸炎（腸道長(zhǎng)期丟失蛋白質(zhì)）30

30白蛋白（ALB）測(cè)定由肝實(shí)質(zhì)合成，是血漿中含量最多的蛋白質(zhì)，占TP的40%~60%內(nèi)源性氨基酸源的營(yíng)養(yǎng)源，具有緩沖酸堿的能力血漿中重要的載體（膽紅素、膽汁酸鹽、前列腺素、類固醇激素，金屬離子等）維持血漿膠體滲透壓，其在體液中的濃度可作為各種膜屏障完好的指標(biāo)（分子量較小66400）31

31測(cè)定方法:溴鉀酚綠法（BCG法）：溴鉀酚綠是一種陰離子染料，在PH4.2的緩沖液中，在非離子去垢劑聚氧乙烯月桂醚存在時(shí)，可與白蛋白結(jié)合成藍(lán)綠色復(fù)合物，溶液由黃色變成藍(lán)綠色，在660nm時(shí)比色參考值：35~50g/L32

32臨床意義:受飲食中蛋白質(zhì)的攝入量影響，可在一定程度上作為個(gè)體營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)的評(píng)價(jià)指標(biāo)增高：嚴(yán)重脫水減低：①合成降低：急、慢性肝?、跔I(yíng)養(yǎng)或吸收不良③分解或代謝增加：大面積組織損傷或炎癥④消耗性疾病：嚴(yán)重感染、惡性腫瘤等⑤異常丟失：腎病綜合癥、慢性腎炎⑥分布異常：門(mén)靜脈高壓腹水33

33球蛋白及其與白蛋白的比例球蛋白增高：多見(jiàn)于炎癥、免疫系統(tǒng)疾病和腫瘤①細(xì)菌、病毒、寄生蟲(chóng)引起的急慢性感染，如結(jié)核、麻風(fēng)病、血吸蟲(chóng)病、病毒性肝炎等②自身免疫性疾?。合到y(tǒng)性紅斑狼瘡、風(fēng)濕、類風(fēng)濕等③多發(fā)性骨髓瘤和淋巴瘤34

34球蛋白降低：見(jiàn)于血液稀釋、嚴(yán)重營(yíng)養(yǎng)不良、胃腸道疾病白蛋白與球蛋白比值（A/G）①參考值：1~2:1②臨床上常用來(lái)衡量肝臟疾病的嚴(yán)重程度③比值倒置：A/G<1時(shí)，是慢性肝炎或肝硬化的特征之一35

35前白蛋白（P-ALB）測(cè)定由肝細(xì)胞合成，在電泳分離中（PH8.6）移速比白蛋白快，半壽期很短，僅12小時(shí)。除可作為組織修補(bǔ)的材料,還是一種運(yùn)載蛋白，可以和T3、T4結(jié)合，還可以和視黃醇結(jié)合而具有運(yùn)載維生素A的作用。36

36檢測(cè)原理：血清中的PA與抗PA抗體在液相中反應(yīng)成抗原抗體復(fù)合物，使反應(yīng)液呈現(xiàn)濁度。當(dāng)一定量抗體存在時(shí)，濁度與血清中PA（抗原）的含量成正比，利用散射比濁或透射比濁技術(shù)，與同樣處理的PA標(biāo)準(zhǔn)比較，求得樣品中PA含量。參考值：散射比濁法：22~40mg/dL37

37臨床意義：①診斷和監(jiān)測(cè)營(yíng)養(yǎng)不良：血清P-ALB在無(wú)感染的情況下，是兒童營(yíng)養(yǎng)不良的靈敏指標(biāo)。②診斷肝?。涸诟窝自缙冢錆舛认陆低缬谄渌宓鞍壮煞值母淖?。有研究表明，動(dòng)態(tài)隨訪測(cè)定血清P-ALB對(duì)重型肝炎預(yù)后有較大的參考價(jià)值。P-ALB明顯上升，往往預(yù)后良好，P-ALB持久下降，預(yù)后險(xiǎn)惡。③是一種負(fù)性急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，急性時(shí)相反應(yīng)時(shí)下降。④有研究表明，P-ALB可以作為癌癥的篩選指標(biāo)。38

38附注：血清蛋白質(zhì)的濃度用“g/L”表示，因?yàn)檠逯懈鞣N蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量不同，所以不能用mol/L表示。本法屬濁度反應(yīng)，試劑有任何可見(jiàn)的混濁，應(yīng)棄去不用，否則對(duì)結(jié)果有較大影響。血清標(biāo)本如不能及時(shí)測(cè)定，應(yīng)置2~8℃冰箱保存，可穩(wěn)定2天。39

39堿性磷酸酶（ALP）的測(cè)定一組在pH9~10.5的堿性環(huán)境中能催化有機(jī)磷酸酯水解的酶。血清ALP主要來(lái)源于肝臟、骨骼，少部分來(lái)自小腸和妊娠期胎盤(pán)組織。肝細(xì)胞產(chǎn)生的ALP一般從膽道排入小腸。40

40測(cè)定方法（酶動(dòng)力法）：以磷酸對(duì)硝基酚為底物，2-氨基-2-甲基丙醇為緩沖液對(duì)硝基酚磷酸鹽在ALP的作用下產(chǎn)對(duì)硝基酚和磷酸鹽，在405nm除檢測(cè)對(duì)硝基酚的吸收峰，計(jì)算出血清中的濃度。參考值：1~12歲<500U/L;12~15歲<750U/L;25歲以上40~150U/L。41

41臨床意義：①生理性增高：妊娠3個(gè)月即可產(chǎn)生ALP9個(gè)月到達(dá)高峰（可為同齡婦女的3-4倍）分娩后1個(gè)月恢復(fù)正常新生兒、兒童、青少年骨骼生長(zhǎng)期比成人要高1~5歲（第一個(gè)高峰）是成人的2~3倍10~18歲（第二個(gè)高峰）是成人的4~5倍②肝膽管梗阻：ALP升高。（ALP分布在肝細(xì)胞的血竇側(cè)和毛細(xì)膽管側(cè)的微絨毛上，經(jīng)膽汁排入小腸。梗阻性黃疸時(shí)，由于肝內(nèi)、外梗阻膽汁排出不暢，再加上膽汁具有表面活性劑作用可洗脫ALP返流入血，使血中濃度升高）42

42③肝炎或肝硬化：可輕度升高，但很少超過(guò)上限3倍④原發(fā)或繼發(fā)性肝癌：明顯升高。（腫瘤組織或炎癥刺激肝細(xì)胞產(chǎn)生ALP）⑤骨骼系統(tǒng)疾病：可有不同程度的升高（骨折恢復(fù)期、佝僂病轉(zhuǎn)移性骨腫瘤）⑥其他疾病：甲亢、肢端肥大癥等可輕度升高43

43附注：血清置室溫(25℃)ALP活性顯示輕度升高。例如室溫6h，酶活性約增高1%，置1-4天，酶活性增高3%-6%。血清貯存冰箱(4℃)酶活性亦出現(xiàn)緩慢地升高。冰凍血清ALP活性降低，但當(dāng)血清復(fù)溫后，酶活性會(huì)慢慢恢復(fù)。質(zhì)控血清或凍干質(zhì)控血清亦呈現(xiàn)類似的ALP活性升高現(xiàn)象一般用血清或肝素抗凝血漿測(cè)定ALP活性?？鼓齽┤绮菟猁}、檸檬酸鹽和EDTA·Na2能抑制ALP的活性，不能使用這類抗凝劑的血漿做ALP的活性測(cè)定ALP活性與血清在反應(yīng)液中所占體積分?jǐn)?shù)有關(guān)。已發(fā)現(xiàn)當(dāng)血清體積分?jǐn)?shù)從1/26降低到1/51時(shí)，所測(cè)出的酶活性隨之增高;但低于1/51后，酶活性沒(méi)有進(jìn)一步增加。這一效應(yīng)的原因還不清楚，可能是因?yàn)樵诟呦♂尪认翧LP多聚體解聚所致44

44γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的測(cè)定γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶是在氨基酸吸收中，參與γ-谷氨基循環(huán)的一個(gè)重要的酶。血清中GGT主要來(lái)自肝臟，少量來(lái)自腎臟、胰腺。GGT在肝臟中主要由肝細(xì)胞的線粒體產(chǎn)生，90%為膜結(jié)合型。45

45測(cè)定原理：以γ-谷氨酸-3-羧基-4-對(duì)硝基苯胺和雙甘肽為底物，GGT作用于γ-谷氨酸-3-羧基-4-對(duì)硝基苯胺和雙甘肽產(chǎn)生γ-谷氨酸雙甘肽和5-氨基-2-硝酸苯甲酸鹽，在450nm處檢測(cè)吸收峰，計(jì)算GGT的濃度。γ-谷氨酸-3-羧基-4-對(duì)硝基苯胺+雙甘肽γ-谷氨酸雙甘肽+5-氨基-2-硝酸苯甲酸鹽參考范圍：男性：11U/L~50U/L女性：7U/L~32U/LGGT46

46臨床意義：①生理性變化：新生兒至6個(gè)月以內(nèi)的小嬰兒明顯高于成人3~5倍。②病毒性肝炎：急性肝炎肝細(xì)胞可合成和釋放GGT，是其在血清中的濃度輕度升高，變化一般與ALT平行，但是幅度較低。（若在恢復(fù)期其他肝功能指標(biāo)都已正常，但GGT仍未復(fù)原，提示肝炎尚未痊愈，若反復(fù)波動(dòng)或長(zhǎng)期維持較高水平，則應(yīng)考慮肝炎有慢性化趨勢(shì)）47

47③原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性肝癌：增高。GGT和AFP同樣具有癌胚抗原的性質(zhì)，特別是在結(jié)節(jié)性增生時(shí)出現(xiàn)強(qiáng)活性，能夠反映肝內(nèi)占位性病變。監(jiān)測(cè)血中的GGT濃度可觀察腫瘤療效和預(yù)后。④梗阻性黃疸：血中GGT升高明顯，可達(dá)正常的5~30倍。是膽汁淤積、膽道梗阻最敏感的酶。（梗阻時(shí)間越長(zhǎng)、程度越重，GGT上升幅度越大）48

48⑤急、慢性酒精性肝炎：血清濃度升高，但是GGT升高幅度跟飲酒量沒(méi)有明顯的相關(guān)性。⑥肝硬化：代償期正常，若失代償期或伴有炎癥、進(jìn)行性纖維化則GGT升高，其升高程度與纖維化成正比。49

49⑦其他：如系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）、單核細(xì)胞增多癥等可使GGT輕度升高。注：測(cè)定ALP、GGT有助于鑒別ALP的來(lái)源：GTT與ALP同時(shí)增高常源于肝臟疾病，而GGT正常，ALP升高常源于肝外疾病，如骨骼疾病。50

50附注：紅細(xì)胞中L-γ-谷氨酰基移移酶含量低，溶血標(biāo)本對(duì)測(cè)定結(jié)果影響不大血清中GGT的活力，在室溫或4℃可穩(wěn)定7d;在冷凍狀態(tài)下可穩(wěn)定2個(gè)月51

51膽堿酯酶（CHE）的測(cè)定膽堿酯酶分為兩大類：真性膽堿酯酶，也叫乙酰膽堿酯酶（ACHE），存在于紅細(xì)胞、肺、腦組織、交感神經(jīng)節(jié)等處。主要是水解乙酰膽堿。假性乙酰膽堿（PCHE）存在于血清或血漿中，出可作用于乙酰膽堿，還可作用于其他膽堿類化合物。PCHE是一種糖蛋白，由肝臟合成。含有機(jī)磷的殺蟲(chóng)劑能抑制紅細(xì)胞內(nèi)的真性膽堿酯酶和血清中的假性膽堿酯酶。52

52測(cè)定原理:CHE作用于硫代丁酰膽堿，最后生成5,5-二硫雙2-硝基苯甲酸是黃色化合物，動(dòng)態(tài)檢測(cè)410nm除的最大吸收峰，計(jì)算出血清膽堿酯酶的濃度硫代丁酰膽堿+CHE硫代膽堿+丁酸硫代膽堿+二硫代雙硝基苯甲酸5-巰基-2-硝基苯甲酸+2-硝基苯甲酸-5-硫基硫代膽堿參考范圍：4000~12600U/L53

53臨床意義：①肝臟疾?。涸诓∏閲?yán)重的肝炎患者中，PCHE降低與肝病變程度成正比。慢性肝炎、肝硬化、肝癌時(shí)如PCHE持續(xù)降低則提示預(yù)后不良。②口服避孕藥或雌激素時(shí)，血清PCHE會(huì)降低③營(yíng)養(yǎng)不良、有機(jī)磷中毒血清PCHE會(huì)降低④肥胖、脂肪肝、甲亢等血清PCHE會(huì)升高54

54附注：用血清或肝素血漿。輕度溶血不干擾，但必須離心去除紅細(xì)胞及影細(xì)胞。標(biāo)本如無(wú)菌，PCHE在室溫可穩(wěn)定數(shù)十天,-20℃穩(wěn)定3年血清經(jīng)稀釋后，PCHE易失活，如需稀釋必須在用前進(jìn)行。55

55總膽汁酸（TBA）的測(cè)定膽汁酸在肝內(nèi)合成、分泌、加工、轉(zhuǎn)化。是膽汁的主要成分，當(dāng)肝細(xì)胞損傷或膽道阻塞時(shí)，會(huì)引起膽汁酸代謝障礙，出現(xiàn)血清膽汁酸增高。測(cè)定血清中總膽汁酸可以作為判斷肝膽系統(tǒng)正常與否的重要信息。血清中TBA的診斷價(jià)值已得到廣泛重視，它不僅用于臨床診斷，而且還能反映病情和估計(jì)疾病預(yù)后。56

56測(cè)定原理：循環(huán)酶法（第五代）膽汁酸被3α-羥基類固醇脫氫酶及β-硫代煙酰胺嘌呤二核苷酸氧化型特異性的氧化，生成的3-酮類固醇在3α羥基類固醇脫氫酶及β-硫代煙酰胺嘌呤二核苷酸還原型存在下，生成膽汁酸及β-硫代煙酰胺嘌呤二核苷酸氧化型。參考值：0~15μmol/L57

57臨床意義：①急性肝炎：在肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞病變時(shí)，患者的膽汁酸水平升高②慢性活動(dòng)性肝炎：血清膽汁酸水平升高（由于門(mén)-腔靜脈旁路的形成，膽汁酸不再局限于肝腸循環(huán)中,膽汁酸可以直接進(jìn)入腔靜脈導(dǎo)致分布異常。）③膽汁淤積綜合癥：血清膽汁酸升高（肝內(nèi)外膽汁淤積，膽汁分泌障礙，不能有效的排出膽汁酸）58

58附注：由于血清中TBA含量低，樣品中存在干擾物質(zhì)的影響相對(duì)較大，其中主要為乳酸脫氫酶(LDH)。由LDH生成的NADH往往比TBA生成的量要大得多。因此，測(cè)定前除去血清中LDH的影響至關(guān)重要。方法有①血清67℃加溫30min②加草氨酸作為L(zhǎng)DH封閉劑③堿或酸處理④用丙酮酸鈉抑制LDH活性。上述四類方法中，以丙酮酸鈉抑制法最好，可免去前處理步驟，直接加入反應(yīng)體系，不影響體系的pH，且對(duì)反應(yīng)無(wú)干擾59

59謝謝！Thankyou!60