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菌種的保藏
1(1)菌種保藏的目的及原理(2)菌種保藏的方法(3)注意事項(xiàng)
2㈠菌種保藏的目的及原理菌種保藏是保證生產(chǎn)菌種質(zhì)量的重要環(huán)節(jié),其目的在于不污染雜菌,使退化和死亡降低到最低限度,盡可能使菌種保持原來的優(yōu)良性狀?;驹恚焊鶕?jù)菌種的生理、生化特性,人為的創(chuàng)造條件,使微生物的代謝處于不活潑、生長繁殖受到抑制的休眠狀態(tài),以減少菌種的變異。
3保藏時(shí)一般利用菌種的休眠體(孢子、芽孢等)并創(chuàng)造有利于休眠狀態(tài)的環(huán)境條件,如降低培養(yǎng)基營養(yǎng)成分、低溫、干燥、缺氧和添加保護(hù)劑等,使菌種的代謝活性處于最低狀態(tài),以達(dá)到防止菌種退化、死亡的目的。
4㈡常用的保藏方法1、斜面低溫保藏法將菌種接種在適宜的固體斜面培養(yǎng)基上,待菌充分生長后,棉塞部分用油紙包扎好,移至2-8℃的冰箱中保藏。此法為實(shí)驗(yàn)室和工廠菌種室常用的保藏法,優(yōu)點(diǎn)是操作簡單,使用方便,不需特殊設(shè)備,能隨時(shí)檢查所保藏的菌株是否死亡、變異與污染雜菌等。缺點(diǎn)是容易變異,因?yàn)榕囵B(yǎng)基的物理、化學(xué)特性不是嚴(yán)格恒定的,屢次傳代會(huì)使微生物的代謝改變,而影響微生物的性狀;污染雜菌的機(jī)會(huì)亦較多。
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63、沙土管保藏法菌種沙土管保藏法多用于能產(chǎn)生孢子的微生物如霉菌、放線菌,因此在抗生素工業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用最廣,效果亦好,可保存2年左右,有的微生物可保藏10年。保藏效果較好,且微生物轉(zhuǎn)接方便,經(jīng)濟(jì)簡便。
74、懸液保藏法懸液保藏法的基本原理是寡營養(yǎng)保藏,是將微生物混懸于不含養(yǎng)分的媒液中加以保藏的方法。此法適用于大部分的放線菌,酵母菌,霉菌以及腸道科細(xì)菌等,其關(guān)鍵在于試管口必須防水密封,一般可保藏1年左右。
85、真空冷凍干燥保藏法此法為菌種保藏方法中最有效的方法之一,對一般生活力強(qiáng)的微生物及其孢子以及無芽胞菌都適用,即使對一些很難保存的致病菌,如腦膜炎球菌與淋病球菌等亦能保存。適用于菌種長期保存,一般可保存數(shù)年至十余年,但設(shè)備和操作都比較復(fù)雜。
96、低溫保藏法低溫保藏法又叫冷凍保藏,是普通的保藏技術(shù)。此法為菌種保藏方法中最有效的方法之一,對一般生活力強(qiáng)的微生物及其孢子以及無芽胞菌都適用,即使對一些很難保存的致病菌,如腦膜炎球菌與淋病球菌等亦能保存。適用于菌種長期保存,一般可保存數(shù)年至十余年,但設(shè)備和操作都比較復(fù)雜。
107、液氮超低溫保藏法液氮超低溫保藏法簡稱液氮保藏法或液氮法。它是以甘油、二甲基亞砜等作為保護(hù)劑,在液氮超低溫(-196℃)下保藏的方法。此法操作簡便、高效、保藏期一般可達(dá)到15年以上,是目前被公認(rèn)的最有效的菌種長期保藏技術(shù)之一。除了少數(shù)對低溫?fù)p傷敏感的微生物外,該法適用于各種微生物菌種的保藏。優(yōu)點(diǎn)是可使用各種培養(yǎng)形式的微生物進(jìn)行保藏,無論是孢子或菌體、液體培養(yǎng)物或固體培養(yǎng)物均可采用該保藏法。其缺點(diǎn)是需購置超低溫液氮設(shè)備,且液氮消耗較多,操作費(fèi)用較高。
11㈢菌種保藏注意事項(xiàng)1、注意選擇適當(dāng)?shù)谋2胤椒ǎ?、采用良好的培養(yǎng)基新鮮培育出來的菌種進(jìn)行保藏,要求菌體健壯或孢子豐滿,種齡要適宜,細(xì)菌要求在穩(wěn)定期;3、必須進(jìn)行嚴(yán)格的無菌操作,注意維持菌種的活性;4、保藏期間,嚴(yán)格防止雜菌污染,為菌種創(chuàng)造最適宜的保藏條件,如控制保藏溫度等;5、嚴(yán)格控制傳代的次數(shù),采用斜面低溫保藏時(shí)尤其注意這點(diǎn);6、保藏菌種恢復(fù)培養(yǎng)時(shí),要轉(zhuǎn)接到保藏以前所用的同一代培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),以維持優(yōu)良性能的穩(wěn)定性。