中藥材佛手的種質(zhì)資源及遺傳多樣性研究碩士論文

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1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文中藥材佛手的種質(zhì)資源及遺傳多樣性研究姓名：郝大慶申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：植物學(xué)指導(dǎo)教師：廖文波20090606中藥材佛手的種質(zhì)資源及遺傳多樣性研究專業(yè)：植物學(xué)姓名：郝大慶指導(dǎo)教師：廖文波教授摘要佛手(Buddha’sHa耐citron)，學(xué)名Cffr“s聊e旃c口L．VaLs口肋如c彬括(Noot．)Sw崦le，為蕓香科柑橘屬植物香櫞(CffM聊P班∞L．)的變種，十大廣藥之一，是傳統(tǒng)的名貴中藥。佛手不僅可供藥用，還可發(fā)展佛手盆景市場(chǎng)，其揮發(fā)油可應(yīng)用于食品和化妝品等方面，因而具有很大

2、的開發(fā)利用價(jià)值。但由于長(zhǎng)期以來(lái)粗放種植，致使品種混雜、退化，病蟲害嚴(yán)重，產(chǎn)量和品質(zhì)參差不齊，嚴(yán)重妨礙了佛手產(chǎn)業(yè)的規(guī)范化種植和質(zhì)量控制。本文從植株形態(tài)、SSR分子標(biāo)記兩方面對(duì)采自浙江金華，重慶南龍，廣東肇慶、高要、武壟、潮州、梅州、汕頭(來(lái)自新加坡)等共八個(gè)地方的佛手進(jìn)行分析，以研究其各種質(zhì)間的親緣關(guān)系，為佛手GAP規(guī)范化種植提供有益的技術(shù)支持。從葉片氣孔器特征和花粉兩方面研究三種佛手的形態(tài)差別，觀察和測(cè)量了40枚葉片的氣孔器和50?；ǚ鄣男螤詈痛笮?，發(fā)現(xiàn)來(lái)自浙江、重慶、廣東三個(gè)佛手品種，在氣孔器和花粉形

3、態(tài)特征上比較一致，差異較小。利用Fastprep法成功提取了3省8個(gè)佛手居群的基因組DNA，結(jié)果發(fā)現(xiàn)從當(dāng)年生已完全展開的葉片提取的DNA質(zhì)量和得率都較好，完全滿足實(shí)驗(yàn)需要。利用汕頭(來(lái)自新加坡)和浙江金佛手群體中的植株DNA，從53對(duì)SSR引物中篩選出5對(duì)可以擴(kuò)增出條帶清晰、多樣性高、反應(yīng)穩(wěn)定的引物。其中，CCSM3的擴(kuò)增產(chǎn)物多態(tài)性最高，可以擴(kuò)增出4條在各居群內(nèi)具有多樣性的條帶。其次為P1223可以擴(kuò)增出3條在各居群內(nèi)具有多樣性的條帶。CCSMl9和CCSMl2這兩對(duì)引物只能分辨出汕頭的佛手個(gè)體，多樣性

4、最低。在擴(kuò)增過(guò)程中建立了優(yōu)化的20“l(fā)體積的SSR反應(yīng)體系和PCR反應(yīng)程序。利用篩選出的5對(duì)SSR引物對(duì)8個(gè)居群的122個(gè)個(gè)體進(jìn)行研究，共發(fā)現(xiàn)13Ⅲ個(gè)等位基因。采自汕頭(種源來(lái)自新加坡)的多樣性最高，其香農(nóng)指數(shù)，、觀測(cè)雜合度Z湯、期望雜合度脅分別為O．648、0．733、0．547。其次為廣佛手潮州的居群。廣佛手高要和川佛手重慶群體的多樣性最低，其香農(nóng)指數(shù)厶觀測(cè)雜合度脅、期望雜合度脅都為O，所用引物未能在這兩個(gè)居群中得到具有多態(tài)性的條帶。廣佛手其余各群體多樣性相近。推測(cè)佛手群體尤其是我國(guó)佛手遺傳多樣性很

5、低的原因可能是在約700年的栽培歷史中，長(zhǎng)期營(yíng)養(yǎng)繁殖、人工選擇以及缺乏野生種質(zhì)交流，導(dǎo)致佛手種質(zhì)的遺傳多樣性流失嚴(yán)重，遺傳基礎(chǔ)變得很窄，基因趨于純合。F統(tǒng)計(jì)顯示佛手出現(xiàn)了較高的群體間遺傳分化(鼢=O．277)，群體間基因流小于l(№=O．726)也證實(shí)了這一結(jié)論。采用Mantel統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，比較遺傳距離和地理距離的相關(guān)性，結(jié)果顯示佛手群體間的遺傳距離和地理距離相關(guān)性很高(r=0．903)，但顯著度很低(P-0．993)，結(jié)果不可靠。這與本實(shí)驗(yàn)的采樣主要集中于廣東境內(nèi)，未采到分布于東南亞等地的佛手居群有關(guān)

6、。而且國(guó)內(nèi)近年來(lái)，佛手干片和鮮果價(jià)格持續(xù)走低，很多種植戶將佛手砍掉，改種其它經(jīng)濟(jì)作物，造成采樣困難。本文的研究結(jié)果顯示：我國(guó)佛手種質(zhì)資源的遺傳多樣性較低，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于新加坡的佛手種質(zhì)的遺傳多樣性。研究的佛手群體可明顯的分為3大類：采自廣東汕頭(來(lái)自新加坡)的自成一支，與其它種群的遺傳距離較大；廣佛手5個(gè)群體與重慶采的川佛手親緣關(guān)系很近，一共6個(gè)居群構(gòu)成一支；金佛手自成一支，介于新加坡分支和由廣佛手、川佛手共同構(gòu)成的分支之間。推測(cè)川佛手很可能是由廣佛手傳播到當(dāng)?shù)兀陂L(zhǎng)期的栽培歷史中在人工選育下形成的。而廣佛手

7、則可能與金佛手來(lái)自同一種源，都是來(lái)自東南亞國(guó)家。關(guān)鍵詞：佛手形態(tài)特征SsR遺傳多樣性ⅣStudyonGemplasmResourcesandGeneticDiVersityofa護(hù)淞所e西c口var．s口聊如c加覷s(Noot．)Swingle【／。Z力。ZZS所edZC口Var．。S口聊口口C砂Z擾SL上NOOL夕3Wlng王eM旬or：BotanyNanle：HaoDaqiI嗨SuperviSor：Pro￡LiaoWerll)0AbstractC泐‘螂研P坊亡口var．舳咒Dd∞句P，螂(Noot．

8、)SwiIlglc(Buddha．sHalldcitron)isa丘agraIltcitronVariety，who∞劬itissegInemed缸o(hù)fmger-m(esecti0Ils．Buddha’sHaIldcitron觚itsusuaUyIIlature劬mlate伍lltoearlyw硫er．ThesⅡced，driedpeelofyellow劬itispresCribed∞atonjcintrad“iomlmedicm．舢so，