rna干擾與鼻咽癌的研究進(jìn)展

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1、RNA干擾與鼻咽癌的研宄進(jìn)展【】RNA干擾(RNAi)是利用雙鏈小片段RNA高效、特異性地降解細(xì)胞內(nèi)同源mRNA，阻斷體內(nèi)基因表達(dá)，使細(xì)胞出現(xiàn)靶基因缺失的表型［1］。近幾年，RNA干擾研宄在國(guó)內(nèi)外迅速開(kāi)展，并且擴(kuò)大到許多方面，如抑制病毒的研究、抑制多藥耐藥基因的表達(dá)、在人體寄生蟲(chóng)研究中的應(yīng)用、基因治療、腫瘤研究等。而鼻咽癌的發(fā)病機(jī)制與許多致病因素有關(guān)，實(shí)驗(yàn)研究表明RNAi可以通過(guò)多種途徑影響鼻咽癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，因此RNAi可能為鼻咽癌治療提供新的方法?！娟P(guān)鍵詞】RNA干擾鼻咽腫瘤小干擾RNAlRN

2、Ai的基本過(guò)程和作用機(jī)制RNA干擾(RNAinterference,RNAi)是由雙鏈RNA(doublestrandedRNA,dsRNA)介導(dǎo)、特異性地降解相應(yīng)序列的mRNA,從而導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄后水平的基因沉默(posttranscriptionalgenesilencing,PTGS)現(xiàn)象，具有高效性和高度特異性，已成為基因功能研宄中的一種快速、簡(jiǎn)便的新方法。目前主要有3種作用機(jī)制形式，即轉(zhuǎn)錄水平、翻譯水平和轉(zhuǎn)錄后水平。其中轉(zhuǎn)錄后水平是RNAi在各種生物中實(shí)現(xiàn)的主要方式。轉(zhuǎn)錄水平其干擾機(jī)制是通過(guò)

3、改變靶基因染色質(zhì)結(jié)構(gòu)，RNA干擾與鼻咽癌的研宄進(jìn)展【】RNA干擾(RNAi)是利用雙鏈小片段RNA高效、特異性地降解細(xì)胞內(nèi)同源mRNA，阻斷體內(nèi)基因表達(dá)，使細(xì)胞出現(xiàn)靶基因缺失的表型［1］。近幾年，RNA干擾研宄在國(guó)內(nèi)外迅速開(kāi)展，并且擴(kuò)大到許多方面，如抑制病毒的研究、抑制多藥耐藥基因的表達(dá)、在人體寄生蟲(chóng)研究中的應(yīng)用、基因治療、腫瘤研究等。而鼻咽癌的發(fā)病機(jī)制與許多致病因素有關(guān)，實(shí)驗(yàn)研究表明RNAi可以通過(guò)多種途徑影響鼻咽癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，因此RNAi可能為鼻咽癌治療提供新的方法?！娟P(guān)鍵詞】RNA干擾鼻咽

4、腫瘤小干擾RNAlRNAi的基本過(guò)程和作用機(jī)制RNA干擾(RNAinterference,RNAi)是由雙鏈RNA(doublestrandedRNA,dsRNA)介導(dǎo)、特異性地降解相應(yīng)序列的mRNA,從而導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄后水平的基因沉默(posttranscriptionalgenesilencing,PTGS)現(xiàn)象，具有高效性和高度特異性，已成為基因功能研宄中的一種快速、簡(jiǎn)便的新方法。目前主要有3種作用機(jī)制形式，即轉(zhuǎn)錄水平、翻譯水平和轉(zhuǎn)錄后水平。其中轉(zhuǎn)錄后水平是RNAi在各種生物中實(shí)現(xiàn)的主要方式。轉(zhuǎn)

5、錄水平其干擾機(jī)制是通過(guò)改變靶基因染色質(zhì)結(jié)構(gòu)，使其基因轉(zhuǎn)錄受限，關(guān)閉表達(dá)系統(tǒng)。dsRNA被降解成2123個(gè)核苷酸長(zhǎng)的小片段RNA時(shí)，這些小的RNA分子在細(xì)胞核內(nèi)可以誘導(dǎo)組蛋白H3的基因及相應(yīng)DNA的甲基化［2］。這種序列特異性甲基化的信號(hào)與RNA和DNA結(jié)合有關(guān)。當(dāng)dsRNA含有與啟動(dòng)子同源的序列，即可使同源靶啟動(dòng)子序列甲基化，從而使靶啟動(dòng)子失去功能，導(dǎo)致下游基因沉默，則轉(zhuǎn)錄不能進(jìn)行。若甲基化出現(xiàn)在編碼區(qū)，轉(zhuǎn)錄能進(jìn)行，但在轉(zhuǎn)錄后水平上沉默。翻譯水平［3］主要干擾機(jī)制是通過(guò)抑制相應(yīng)mRNA的翻譯，使

6、相應(yīng)的蛋白質(zhì)表達(dá)受阻。其中起重要作用的是微RNA(microRNA,miRNA),它是由長(zhǎng)度約70?nt的RNA形成的莖環(huán)樣前體，經(jīng)Dicer酶作用后形成長(zhǎng)約2125?nt的單鏈RNA，與相關(guān)蛋白結(jié)合成誘導(dǎo)沉默復(fù)合物［4］(RNAinducedsilencingcomplex，RISC)，然后識(shí)別并結(jié)合在mRNA的3'末端非翻譯區(qū)上，阻止核糖體與mRNA的結(jié)合及核糖體的移行，從而抑制翻譯的進(jìn)行。轉(zhuǎn)錄后水平目前，轉(zhuǎn)錄后水平上的干擾是研究最多、最清楚的一種機(jī)制。其作用大致可分為以下兩個(gè)階段。siRN

7、A形成階段外/內(nèi)源性dsRNA通過(guò)Argonaute家族基因編碼的蛋白質(zhì)的識(shí)別，誘導(dǎo)dsRNA與Dicer結(jié)合。在A(yíng)TP的參與下被Dicer酶切成2123?nt長(zhǎng)度的小干擾RNA(smallinterferingRNA,siRNA)。Billy等［5］在小鼠畸胎瘤細(xì)胞F19和P19的細(xì)胞質(zhì)提取物中發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)727?bp的dsRNA被剪切為約2123?nt片段，即siRNA,強(qiáng)烈抑制了同源基因的表達(dá)。Zamore等［6］報(bào)道，無(wú)活性RISC存在于胚胎細(xì)胞中，并以250?ku分子質(zhì)量的前體形式存在，在A(yíng)

8、TP激活下加工成100?ku的RISC，切割底物mRNAoRISC與互補(bǔ)的靶mRNA結(jié)合，在酶的催化下切割、降解，從而達(dá)到干擾基因表達(dá)的作用。擴(kuò)增循環(huán)階段RNAi的擴(kuò)增循環(huán)機(jī)制即特異性siRNA與靶mRNA結(jié)合后，沒(méi)有被活性酶切割、降解。而是以siRNA中的一條鏈為引物，以靶mRNA的研究進(jìn)展為模板，在RNA依賴(lài)的RNA聚合酶的作用下，延伸形成新的雙鏈RNA，被Dicer內(nèi)切酶或相關(guān)酶切割為新的2123?ntsiRNA。2RNAi的特征高效性［7］注入細(xì)胞內(nèi)的siRNA比細(xì)胞內(nèi)的mRNA量要少得