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《間歇低氧對肝臟損傷機制及自噬在肝臟中作用機制的探討-碩士論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、分類號：R56學校代碼：10062密級：學號：2012601124學位類別：科學學位?專業(yè)學位?學科門類：醫(yī)學博士學位論文DOCTORALDISSERTATION論文題目：間歇低氧對肝臟損傷機制及自噬在肝臟中作用機制的探討TITLEInvestigationofthemolecularmechanismoofIHinducedhepaticinjureandtheeffectofautophagyinLiver一級學科：臨床醫(yī)學二級學科：內(nèi)科學呼吸系病論文作者：邵紅霞指導教師：吳琦教授導師組成員：孫昕主任醫(yī)師陳懷永研究員天津醫(yī)科大學研究
2、生院二〇一六年五月中文摘要目的：阻塞性睡眠呼吸暫停（Obstructivesleepapnea，OSA）是常見的呼吸系統(tǒng)疾病，據(jù)統(tǒng)計有超過10%的人群罹患此病。OSA對于身體的嚴重危害及致死率增加，主要是因為OSA常合并糖尿病，代謝綜合征，心血管系統(tǒng)疾病等。目前很多證據(jù)顯示，由于OSA患者發(fā)生了氣體交換障礙（反復低血氧和高碳酸血癥）的病生理改變，即慢性間歇低氧（chronicintermittenthypoxia，CIH），導致前炎癥因子產(chǎn)物增多，血管內(nèi)皮功能紊亂，氧化應激，代謝調(diào)節(jié)異常和胰島素抵抗等。因為肝臟在人體是十分重要的代謝器官
3、，肝細胞對各種內(nèi)源性和外源性刺激如病毒感染、炎癥、營養(yǎng)等非常敏感，現(xiàn)有很多報道OSA與肝臟的非酒精性脂肪性肝?。╪onalcoholicfattyliverdisease，NAFLD）有關。本研究旨在通過間歇低氧動物模型探討間歇低氧引起的肝臟損害，對肝臟藥物代謝酶細胞色素酶P450（CytochromeP450，CYPs）的影響及作用機制，從自噬角度對間歇低氧的作用做了進一步探討。我們的實驗證實糖皮質(zhì)激素受體（glucocorticoidreceptor，GR）對大鼠肝臟細胞色素酶P450（Cyps）的表達有重要的調(diào)控作用，并且對自噬有
4、一定影響，所以我們又通過人的正常肝細胞LO2細胞初步探討糖皮質(zhì)激素在人肝臟細胞CYPs代謝的影響及自噬中的作用。方法：1.建立間歇低氧（intermittenthypoxia，IH）大鼠模型，將30只大鼠采用隨機數(shù)字表法隨機分為2組（按照每組15只分組）：IH組和對照組。2.大鼠肝臟組織進行固定、包埋、病理切片，然后進行蘇木素-伊紅(HE)染色，觀察肝組織形態(tài)學改變。3.通過實時定量PCR方法測定炎癥因子、Cyps、NF-κB、核受體的相對基因表達量。4.使用實時定量PCR法分析肝臟自噬相關蛋白的基因表達。5.將人正常肝細胞LO2肝細胞
5、進行常規(guī)培養(yǎng)，然后傳代，將傳代細胞按順序分別接種于6孔板，根據(jù)加入藥物不同，分為對照組，糖皮質(zhì)激素（地塞米松，DEX）組和糖皮質(zhì)激素+糖皮質(zhì)激素受體拮抗劑（DEX+R）組；對照組：正常細胞培養(yǎng)；DEX組：加入地塞米松進行培養(yǎng)；DEX+R組：在DEX組基礎上加用糖皮質(zhì)激素受體拮抗劑。I6.通過倒置顯微鏡觀察人肝細胞LO2細胞形態(tài)的改變及生長情況變化并進行拍照。7.通過實時定量PCR方法測定肝細胞LO2細胞Cyps的相對基因表達量。8.使用實時定量PCR法分析測定肝細胞LO2細胞自噬相關蛋白的基因表達。結(jié)果：1.對照組和間歇低氧組大鼠肝組織
6、病理形態(tài)學改變：對照組：肝小葉結(jié)構完整，竇狀隙及匯管區(qū)未見明顯增寬及結(jié)構紊亂，肝細胞胞膜完整，胞質(zhì)豐富，胞核形態(tài)正常，與正常肝組織無差異；間歇低氧組：肝小葉結(jié)構完整，竇狀隙呈輕度增寬，肝細胞結(jié)構完整，匯管區(qū)可見少許炎細胞浸潤，以淋巴細胞為主，少許肝細胞胞質(zhì)稀疏。2.肝組織炎癥介質(zhì)mRNA相對表達量的改變：IH組IL-1β、IL-6、TNFαmRNA相對表達量較對照組升高。3.肝組織NF-κBmRNA相對表達量的改變：IH組NF-κBmRNA相對表達量較對照組顯著升高。4.核受體mRNA相對表達量的改變：IH組PXR、GR、CARmRNA
7、相對表達量較對照組下調(diào)。5.細胞色素氧化酶P450（Cyps）mRNA相對表達量的改變：IH組Cyp1A2、Cyp2D4、Cyp3A2mRNA相對表達量較對照組下降有統(tǒng)計學差異；Cyp2C9、Cyp2C19mRNA相對表達量與對照組相比無明顯差異。6.細胞自噬相關基因（Atg）相對表達量的改變：IH組與對照組相比，AMPK，mTOR，Beclin1，Atg5，Atg12，Atg13，ULK1均有相應改變但無統(tǒng)計學意義，LC3與WIPI的變化有統(tǒng)計學意義。7.肝LO2細胞生長情況：地塞米松組LO2細胞生長變形，呈梭形生長，而加入糖皮質(zhì)激素
8、受體拮抗劑組，LO2細胞生長與對照組相同，為正常細胞形態(tài)。8.肝LO2細胞Cyps表達：通過熒光實時定量PCR詳細闡述了各組人細胞色素酶P450（hCYP450）中hCYP1A2、hCYP2C9、hCYP2
