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《基于小鼠模型探析哮喘的發(fā)病機(jī)制,內(nèi)科論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、基于小鼠模型探析哮喘的發(fā)病機(jī)制,內(nèi)科論文[摘要]目的探討哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）/真核生物始動(dòng)因子4E結(jié)合蛋白1（4EBP1）/缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）/血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）信號(hào)通路在哮喘小鼠中的表達(dá)及意義。方法40只SPF級(jí)6~8周齡雌性Balb/c小鼠隨機(jī)分為對照組、哮喘組、布地奈德干預(yù)組及mTOR抑制劑（雷帕霉素）干預(yù)組，每組10只。卵清蛋白致敏激發(fā)建立哮喘小鼠模型，各干預(yù)組分別在激發(fā)前30min給予雷帕霉素3mg/kg腹腔注射或布地奈德混懸液1mg霧化吸入，對照組和哮喘組以生理鹽水代替。于末次激發(fā)24h后處
2、死小鼠，收集肺泡灌洗液（BALF），采用ELISA法測定HIF-1α、VEGF水平；取肺組織行蘇木精-伊紅（HE）染色觀察其病理變化；免疫組化染色和ethodsFortySPFlevel6-8aleBalb/Cmicelydividedintocontrol,asthma,budesonideandmTORinhibitor（rapamycin）interventiongroups（n=10each）。Theasthmaticmousemodelinisteredycinatthedosageof3mg/kgbyanintraperitonealinje
3、ctionorbudesonidesuspensionatthedosageoflmgbyaerosolinhalationrespectively30minutesbeforetheOVAchallenge.Thecontrolandasthmagroupsalsalineinstead.TheconcentrationsofHIF-1αandVEGFinbronchoalveolarlavagefluid（BALF）inedusingELISA24hoursafterthelastchallenge.Thepathologicalchangesofl
4、ungtissueatoxylin-eosin（HE）staining.Thep-mTORandp-4EBP1fromthelungtissuesmunohistochemistryandammaliantargetofrapamycin;Eukaryoteinitiatingfactor4Ebindingprotein1;Hypoxiainduciblefactor-1α；Vascularendothelialgroammaliantargetofrapamycin,mTOR）是一種高度保守的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，由于處于生長調(diào)節(jié)的中心環(huán)節(jié)而倍受關(guān)注
5、,在炎癥損傷、免疫應(yīng)答及腫瘤等方面發(fā)揮重要作用[2-3].研究發(fā)現(xiàn)mTOR高表達(dá)也同樣存在于哮喘中，這可能因?yàn)閙TOR參與了哮喘氣道炎癥浸潤及氣道重塑等病理過程[4],而mTOR抑制劑雷帕霉素能阻斷這一過程抑制哮喘的發(fā)生，但mTOR是如何通過下游靶蛋白參與哮喘的發(fā)生少見相關(guān)報(bào)道。真核生物始動(dòng)因子4E結(jié)合蛋白1（eukaryoteinitiatingfactor4Ebindingprotein1,4EBP1）是mTOR下游的一個(gè)重要靶蛋白，激活后可促進(jìn)包括缺氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxiainduciblefactor-1α，HIF-1&alp
6、ha;）、血管內(nèi)皮生長因子（vascularendothelialgroTOR可能通過激活4EBP1從而引起HIF-1α及VEGF表達(dá)增加促進(jìn)哮喘發(fā)生，而磷酸化的mTOR、4EBP1（即p-mTOR、p-4EBP1）被認(rèn)為是該信號(hào)通路激活的標(biāo)志，本研究通過建立小鼠哮喘模型，檢測肺組織p-mTOR、p-4EBP1及肺泡灌洗液中HIF-1α、VEGF的表達(dá)，從而進(jìn)一步明確哮喘的發(fā)病機(jī)制，尋找有效治療哮喘的新方法?！ ?材料與方法?！ ?.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與試劑。 SPF級(jí)6~8周齡雌性Balb/c小鼠40只，體重為18~22g,由河南省動(dòng)
7、物實(shí)驗(yàn)中心提供。p-mTOR、p-4EBP1抗體（美國SantaCruz公司），雷帕霉素、卵清蛋白（OVA）（美國Sigma公司）?！ ?.2動(dòng)物模型制備與分組?！ ?2345
